地塞米松、反应停对小鼠H,22移植瘤生长的影响及机理初探-免疫学专业论文.docxVIP

中文摘要地塞米松、反应停对小鼠H：。移植瘤生长的影响及机理初探 中文摘要 地塞米松、反应停对小鼠H：。移植瘤生长的影响及机理初探 摘 要 研究目的：肿瘤是目前我国疾病夕匕亡的主要原因之一，向原发性 肝癌在恶性肿瘤中死亡率又是排在前列，严重威胁人民的健康。目前 外科手术切除仍然是肝癌治疗中比较有效的手段，但能行手术切除的 仅占全部患者的5．4％～24．3％。对不能手术的中、晚期肝癌患者，单 纯使用化疗或放疗，疗效还不理想。二十世纪七十年代，Folkman根据 实体瘤生长总伴随并依赖血管生成这一现象，提出了抗血管生成治疗 肿瘤的策略。随后的事实证明，实体瘤的恶性增长、浸润及转移确实 依赖于新生血管不断提供养料和氧，因此以阻断肿瘤细胞诱发的血管 生成来抑制、治疗实体肿瘤的思路被越来越多的人所接受。在对白血 病等血液病的治疗中，抗血管生成治疗也显示出一定的效果。体内的 血管生成是一个多步骤的现象，参与多种生理和病理过程，如：胚胎 发生，月经周期，伤口愈合，肿瘤的发生、发展和转移等。抗血管生 成疗法就是要阻止或减弱肿瘤细胞诱发的血管生成现象的发生。与传 统的放、化疗相比，抗血管生成治疗一般并不会损伤正常血管，具有 副作用较小的优点。其次，针对血管内皮细胞的抗血管生成疗法从原 理上讲应该不会或只会引起很低的抗药性反应。此外，抗血管生成疗 法从原理上说可适用于所有实体肿瘤的治疗。这些特点使得抗血管生 成疗法在肿瘤治疗中的应用，呈现出很有前途的发展趋势。大多数肝 癌随肿瘤体积增大，血管密度增加，表现为肝动脉供血的多血供型， 我们推测采用抗血管生成疗法治疗肝癌町能会取得较好的抑瘤效果。 此外，对一些不能手术的大肝癌，行肝动脉结扎或栓塞治疗时，如果 配合抗血管生成治疗也口J-能为部分患者争取到手术的机会和时问。研 究发现，一些已有的药物就具有一定的抗血管生成和抑制肿瘤生长的 作用，但它们确切的抑瘤效果目前尚无定论，它们抗肿瘤的分子机制 及适用范围还未阐明。基于以上想法，我们观察了几种现有的药物对 小鼠H22肝癌细胞株在体内、外生长及对H22移植瘤血管生成的影响， 旨在探讨这些药物治疗肝癌的口J．能性。 中文摘要实验方法和结果： 中文摘要 实验方法和结果： 1、药物筛选实验：观察了地塞米松、反应停、鱼精蛋白、肝素、 阿司匹林五种药物对体外培养的小鼠肝癌H22细胞、正常小鼠肝细胞和 人血管内皮细胞的增殖及VEGF naRNA表达的影响。通过药物对体外 培养细胞增殖的影响，反应该药物对肿瘤和／或血管内皮细胞是否具有 直接杀伤作用；通过对培养细胞VEGF ro_,thNA表达的影响，反应该药 物是否对血管生成有直接的抑制作用；并观察了三种不同剂量的药物 对体内H2：移植瘤生长的影响。方法：1)、体外增殖实验：H22细胞、 正常小鼠肝细胞和人脐静脉内皮细胞(ECV-304)分别用20％ NBS．DMEM培养基和1％NBS．DIVIEM培养基配为l×105／Inl，96孔 培养板培养。每孔加入细胞悬液100 m，处理孔分别加入不同浓度的药 物20儿l，对照孔加等体积的生理盐水，用相应培养基补足体积到200 111。培养48 h后，MTT法检测各孔550 nm的吸光度。加入的地塞米 松终浓度分别为9．68 lmaol／L，24．21 lmaol／L，48．41 lmaol／L，96．82 rtmol／L，242．06 rmaol／L，484．12 rtmol／L，968．24 lxmol／L；鱼精蛋白终 浓度为10 mg／L，25 mg／L，50 mg／L，100 mg／L，250 mg／L，500 mg／L， 1 000 mg／L；肝素终浓度为5 U／ml，12．5 U／nil，25 U／ml，50 U／nil，125 U／ml，250 U／ml，500 U／nil。反应停和阿司匹林对H22细胞和ECV．304 细胞增殖的影响只做了高血清浓度培养实验，培养48 h后，做显微计 数。反应停终浓度为0．19 irll]101／L，O．48 mmol／L，0．97 mmol／L，1．94 mmol／L，4．84 mmol／L，9．68 mmol／L，19．36 mmol／L；阿司匹林终浓度 为0．67 mmol／L，1．67 mmol／L，3．33 mmol／L，6．66 mmol／L，16．65 mmol／L， 33．30 mmol／L，66．60 mmol／L。2)、培养细胞的VEGF mRNA表达： H22细胞用20％NBS．DMEM培养基配为l×105／ml，24孔培养板培养。 每孔加入细胞悬液1 000 m，处理孔分别加入不同浓度的药物200 111， 对照孔加入等体积生理盐水，每孔再补加入800 m培养基。加入的地 塞米松终浓度分别为9．68 g