芽孢杆菌的生防菌株筛选及发其抑病机理1.docx

独创性声明本人声明，所呈交的学位(毕业)论文，是本人在指导教师的指导下独立完 独创性声明 本人声明，所呈交的学位(毕业)论文，是本人在指导教师的指导下独立完 成的研究成果，并且是自己撰写的。尽我所知，除了文中作了标注和致谢中已作 了答谢的地方外，论文中不包含其他人发表或撰写过的研究成果。与我一同对本 研究做出贡献的同志，都在论文中作了明确的说明并表示了谢意，如被查有侵犯 他人知识产权的行为，由本人承担应有的责任。 学位(毕业)论文作者亲笔签名：如确 日期： 咿。夕一口了一如 论文使用授权的说明 本人完全了解福建农林大学有关保留、使用学位(毕业)论文的规定，即学 校有权送交论文的复印件，允许论文被查阅和借阅；学校可以公布论文的全部或 部分内容，可以采用影印、缩印或其他复制手段保存论文。 保密，在 年后解密可适用本授权书。 不保密，本论文属于不保密。 学位(毕业)论文作者亲笔签名： 砻丝铂 日期： 砷。小b 徇峪吣＼厶C■一。 指导教师亲笔签名： 日期； 一or，S一 福建农林大学博士学位论文摘 福建农林大学博士学位论文 摘 要 本研究从感染根结线虫的番茄根系中分离到46个细菌菌株，NA平板初筛获得 13个抑制青枯雷尔氏菌生长的拮抗菌株，其抑菌圈宽度达7．1～26．3 mm，同时测得其 中12个菌株对多种植物病原真菌有不同程度的抑制作用。温室试验表明，菌株EN5、 ENl5、ENOI和ENl6对青枯病的于帝病效果最为显著，平均防效分别为70．82％、 89．54％、85．38％和78．81％；而EN5、SWl和SB2能有效降低番茄根结线虫病的根结 指数，抑病效果均达49％。同时测定了这些菌株对青枯病菌一根结线虫复合病的防 治效果，结果表明，EN5、SWl和SB2能显著降低复合病害的病情指数，其中SWl 的防效最佳，青枯病指数比对照下降56．66，根结指数降低5．2l。自然土中重复测定 EN5等7个菌株对青枯病和复合病害的抑病作用，其中菌株EN5、ENl6、SWl和SBl 的抑病效果较为稳定。通过形态和生理生化特征初步鉴定，菌株EN5、ENl5、EN01、 SBI、SB2和SWl等6个菌株为枯草芽孢杆菌(Bacillus subtills)，而ENl6为短小 芽孢杆菌(Bacillus pumilus)；16S rDNA序列分析进一步确定菌株EN5为枯草芽孢 杆菌内生亚种(B．subtilis subsp．endophyticus)。 对菌株EN5、ENl6、SWl和SBl防治番茄青枯病的作用机理进行分析，结果表 明，菌株EN5处理番茄后20d，在番茄根茎部有较高定殖量(达3．60×104efu／g·FW)， 该菌株胞外液无抗菌活性，其抑病效果仅13．56％，菌体抑病效果则高达71．19％，因 此推断其作用机理是以菌体的定殖竞争作用为主；菌株SBl胞外液的抗菌活性相当 显著，其抑病效果达50．85％，而定殖力明显弱于其他三个供试菌株，诱导试验中防 效较差，由此推测其抑病作用主要依赖于胞外液的抗菌活性；SWl和ENl6胞外液的 抑病效果分别为22．03％和27．12％，远低于其菌体的抑病作用，同时两菌株具有较好 的定殖力，说明抑病作用与其菌体的定殖力有关，此外，诱导抗性试验表明两菌株能 有效地诱导番茄抗青枯病，诱发过氧化物酶(POD)、多酚氧化酶(PPO)和苯丙氨 酸解氨酶(PAL)等抗病相关性酶活性的显著增强，因此，诱导抗性是它们的主要抑 病机制之一。 以电镜观察法进一步分析菌株EN5在番茄根茎组织中的分布，结果显示，EN5 主要分布于主根基部及茎部的韧皮组织、细胞间隙等部位。盆栽试验分析EN5菌株 在不同土壤条件、不同接种方式及不同作物中的定殖力，结果表明，菌株EN5在自 然土和灭菌土条件下均能稳定地定殖于番茄植株；浸种、浸根和灌根处理条件下，以 灌根法的定殖效果最佳；在番茄、烟草和黄瓜体内均可定殖，其中在番茄和烟草体内 的定殖量较大。菌株EN5对番茄体内及土壤中微生物种群影响的测定结果表明，EN5 处理后，植株内3类主要微生物种群数量明显减少，丽土壤中微生物种群在处理初期 有所减少，处理后期则多数微生物群体，尤其是氨化细菌、固氮菌等生理微生物群体 福建农林大学博士学位论文 福建农林大学博士学位论文 2 数量显著增多，此外，ERIC．PCR结果也表明，EN5的处理还对根围土中微生物的种 类产生一定的影响。 菌株ENl6和SWl灌根处理后2～10 d内挑战接种青枯病菌，均能有效诱导番茄 对青枯病的抗性，其中以间隔期为7～10d诱导效果最好，与此结果相符的是，POD、 PPO和PAL的酶活力在7-10d时也达到较高值。以灌根和浸种法接种菌株ENl6和 SWI，灌根处理可有效诱导番茄产生抗病性，浸种处理诱导效果较差。盆试测