乌鸡家鸡血清临测定结题报告.pptxVIP

血清成分分析 陈佳丽 潘茜茜 林艳青 指导老师：张旭老师 2012-12-29 目录 实验步骤 对照标准曲线可得：家鸡血清550nm处的光波吸收值为 0.130 。100ml家鸡血清中胆固醇的含量为75mg。 根据参考资料鸡的血清胆固醇的含量在51-196mg/100ml之间是在可信范围内[1]。所以本实验测得家鸡血清胆固醇含量75mg/100ml是在可信范围内。 1.硫酸颜色的高低对显色有影响，所以混合酸的配制和测定过程中的加量都应准确。 2.显色要避免高温（采用混合酸液反应时温度不会升得太高，一般在4到32摄氏度时，颜色能稳定2h）。 3.做标准曲线时试管一定要洁净干燥，因为本身所加的蒸馏水只有0.01ml.。 4.用微量进样器时一定要看清刻度。 5.实验中注意混匀时不要摇晃至产生气泡，防止影响实验结果。 6.实验中注意勿让混合酸腐化分光光度计。 目录 实验步骤血清清蛋白与γ-球蛋白的盐析 实验步骤蛋白质透析与浓缩的实验步骤 实验步骤 凝胶层析的实验步骤 重铬酸钾 蓝葡聚糖 洗脱曲线 1.凝胶层析中观察到试管中的层析液中葡蓝聚糖颜色由浅变深再变浅，重铬酸钾的层析液的颜色变化也是呈这种规律。 2.凝胶在实验前的保存是保存在乙醇中，所以在实验中要洗去凝胶中的乙醇。但是由于洗去乙醇时加的蒸馏水比较多所以在凝胶倾入柱内去水比较的浪费时间。 3.但是在葡蓝聚糖的洗脱液颜色都比较的浅，分析得到是由于在滴加样品时加的样品不够多导致颜色变化不是很明显。 4.在实验中应在柱内凝胶面上加入生理盐水，应为要经常加生理盐水所以每次加生理盐水都会破坏凝胶面的平整影响层析的效果。 醋酸纤维素薄膜、电泳槽 实验步骤醋酸纤维素薄膜电泳的实验步骤 1. 观察比较全血清、血清清蛋白、y-球蛋白的电泳图谱发现全血清图谱较为复杂可见全血清中含有多种蛋白。而血清清蛋白、y-球蛋白的电泳图谱则只有一条线可见实验在盐析、透析时做的比较好使两种蛋白完全分离出来且不含其它蛋白。 2.但是由于点样时画线过猛破坏了醋酸纤维素薄膜，所以在y-球蛋白的图谱中留下点样线。 3.当然在实验中滤纸桥搭的不好使两边的滤纸条发生了相互接触，结果使y-球蛋白的电泳图谱上留下颜色比较浅的痕迹，分析由于试验中薄膜糙面朝下所以有些y-球蛋白会溶于滤纸上影响y-球蛋白的电泳速度。 4.烘干后的薄膜不透明原因是漂洗不够彻底。。 血清：一管为家鸡血清，一管为乌骨鸡血清 1% 谷氨酸溶液，1% 丙酮酸钠溶液，0.1% KHCO3溶液 0.025% 溴乙酸溶液，2% 乙酸溶液 ，0.1% 水合茚三酮的正丁醇溶液 ，0.1% 标准谷氨酸溶液，0.1% 标准丙氨酸溶液 ，1/15 mol/L pH=7.4的磷酸缓冲液，GPT基质液 ，1mmol/L 2，4-二硝基苯0.4mol/LNaOH溶液 实验步骤 家鸡血清550nm处的光波吸收值为 0.026。 乌鸡血清550nm处的光波吸收值为 0.150. 对照标准曲线可得 100ml血清谷丙氨酸酶活力单位数家鸡是26910。乌鸡是139640。 1.所需试剂如基质液、丙酮酸等需冷藏。 2.为防止溶血及其它因素对酶活性影响，实验仪器应干净干燥。 3.为保证操作结果可靠，测定酶活性时应恒定PH、保温时间 4.谷丙氨酸酶活性的鉴定 1染色之后在滤纸上显色有样品0.1mol/L谷氨酸、标准谷氨酸、标准丙氨酸、家鸡的血清中的未被催化的谷氨酸与经过过谷丙转氨酶催化的得到丙氨酸、乌鸡血清中的未被催化的谷氨酸与经过过谷丙转氨酶催化的得到丙氨酸。 2在染色之后的滤纸上发现家鸡与乌鸡的测试管在滤纸上的线有三条。说明除出了丙氨酸与谷氨酸之外还存在其它的氨基酸，分析可能是试剂有污染。 3在滤纸上留下了小点与小斑。分析原因可能是实验时交流有口水留在滤纸上或是实验中的手套已经被污染了。 5）谷丙转氨酶活性测定 实验中测定的谷丙转氨酶的活性乌鸡的活性比家鸡要高。谷丙转氨酶广泛分布于全身各组器官，它在血清中的浓度与其来源的组织细胞更新速度和该器官的功能密切相关。乌鸡血清谷丙转氨酶的活性极显著高于家鸡，表明其所在的组织细胞中的这些酶的含量多，而且这种酶主要存在于肝、心肌、肾，尤其肝脏是物质代谢中枢，可合成大量营养物质，酶的含量高时极有利的条件。 感谢您的关注 Thanks for your attention