微生物可的纯培养及显微技术.pptVIP

巴氏消毒的方法有几种？ 一种是将牛奶加热到62-65℃，保持30分钟。这种方法目前在广东较少使用。采用这一方法，可杀死牛奶中各种生长型致病菌，灭菌效率可达97.3%-99.9%，经消毒后残留的只是部分嗜热菌及耐热性菌以及芽孢等，但这些细菌占多数的是乳酸菌，乳酸菌不但对人无害反而有益健康。 第二种方法将牛奶加热到75-90℃，保温15-16秒，其杀菌时间更短，工作效率更高。但杀菌的基本原则是，能将病原菌杀死即可，温度太高反而会有较多的营养损失。 ● 通过特殊的光学装置——环状光阑和相差板，利用光的 的干涉现象，将光的相位差转变成肉眼可以觉察的振幅差 （明暗差），从而使原来透明的物体表现出明显的明暗差 异，对比度增强。 ● 适于观察不染色的活细胞及细胞内的某些细微结构。 4、荧光显微镜（fluorescence microscope) ● 原理：是紫外线、荧光素（如FITC）、抗体分子（必要时） 一起工作的显微镜。标本用用荧光素覆盖，紫外线直接照射标本。 紫外线将荧光染料中的电子激发，使之呈高能量水平。然后电子 返回到它们初发的能量水平时，通过发射不同颜色的光来释放额 外的能量。 ● 在免疫学、环境微生物学、分子生物学中应用十分普遍如抗原 组织定位等。 普通光学显微镜的分辨率为0.25um。一般细菌都大于0.25um，故可用普通光学显微镜观察。 暗视野显微镜 相差显微镜 荧光显微镜 （一）形态和染色 球 状 杆 状 螺旋状 基本形态 一、细胞的形态构造及其功能 （一）形态和染色 1、球状 细胞个体呈球形或椭圆形，不同种的球菌在细胞分 裂时会形成不同的空间排列方式，常被作为分类依据。 一、细胞的形态构造及其功能 （一）形态和染色 2、杆状 细胞呈杆状或圆柱形，一般其粗细（直径）比较 稳定，而长度则常因培养时间、培养条件不同而有较 大变化。 枯草芽孢杆菌 地衣芽孢杆菌 铜绿假单胞菌 （绿脓杆菌） * * Chapter 2 微生物的纯培养 及显微技术 Sect 1 微生物的分离和纯培养 一、前言 二、微生物操作基本技术——无菌技术 三、微生物的分离和纯培养 四、微生物的保藏技术 一、前言 1、 微生物研究对象：群体 2、研究基础： 1）纯培养技术：把特定的微生物从自然界混杂存在的状态中 分离、纯化出来的技术。 ● 培养物： 在人为规定的条件下培养、繁殖得到的微生物群 体称为培养物。 ● 纯培养物：只有一种微生物的培养物。 2）显微技术：包括显微标本的制作、观察、测定、分析和记 录。 培养基 二、微生物操作基本技术——无菌技术 1、微生物培养的常用器具及其灭菌 1）常用器具：试管、玻璃烧瓶、平皿、接种环（针）、无菌操 作台、酒精灯等 2）灭菌： ●灭菌(sterilization)：杀灭物体上所有微生物的方法。即采用 强烈的理化因素使任何物体内、外部的一切微生物永远丧失其生 长繁殖能力的措施。它比消毒要求高，包括杀灭细菌芽胞在内的 全部病原微生物和非病原微生物。如高温、辐射、超声波和激光 等。 ●消毒(disinfection)：杀死物体上病原微生物的方法，并不一 定能杀死含芽胞的细菌或非病原微生物。即仅杀死物体表面或内 部一部分对人体有害的病原菌，而对被消毒的生物基本无害的措 施用以消毒的药品称为消毒剂(disinfectant） ●抑菌(bacteriostasis)：抑制体内或体外细菌的生长繁殖。常 用的抑菌剂为各种抗生素。 ●防腐(antisepsis)：利用某种理化因素完全抑制霉腐微生物的生长繁殖而对被消毒的物体基本无害的措施。如低温、缺氧、干燥、高酸、高渗或防腐剂。细菌一般不死亡。 ●无菌(asepsis)：不存在活菌。 （1）常用物理消毒灭菌方法 ● 热力灭菌法； ● 辐射杀菌法； ● 滤过除菌法； ●超声波杀菌法。 A、 热力灭菌法 ●干热灭菌法 ▲焚烧：废弃物、尸体； ▲灼烧：接种环、试管口； ▲干烤：玻璃器皿； ▲红外线：医疗器械。 ● 湿热灭菌法 Ⅰ）常压下： ●巴氏消毒法：61.6-62.8 ℃30min或71.7 ℃15-30s,主要用于牛 乳消毒。 ● 煮沸法； ●间歇蒸汽消毒法：80-100 ℃ 15-60 min,37 ℃过夜，循环三 次。主要适用于不耐热培养基灭菌。 Ⅱ）加压下： ● 连续加压灭菌：135-140 ℃下处理5-15 s ，主要适用于大 规模的发酵工厂培养基灭菌； ● 常规加压灭菌：121 ℃