地塞米松和西罗莫司对血管平滑肌细胞增殖及胶原合成的影响-影像医学与核医学专业论文.docxVIP

◇声．“。鼍置 ◇声．“。鼍置 中l¨人学2003级博J学位论史 洗涤后培养24h，离心取上清，。70℃保存待用。 结果：典型的VSMCs呈梭形，具有“波峰波谷”样生长特性，a—actin免 疫组化染色胞浆阳性着色，电镜下可见肌丝、密斑等特征性超微结构。培养的 Mf形态多变，贴壁牢固，CD68免疫组化染色胞浆和胞膜阳性着色，流式细胞 仪检测纯度达90％以上。 结论：本实验中所用的VSMCs和Mf上清液都达到了设计要求。 第二节地塞米松和西罗莫司对平滑肌细胞增殖的影响 目的：观察地塞米松和西罗莫司以及两者联合应用对体外培养的大鼠平滑 肌细胞增殖以及DNA合成的影响。 材料和方法：本组实验共分三部分：1、不同浓度地塞米松的作用：依照地 塞米松终浓度不同共分六组，每组地塞米松的终浓度分别为0(对照组)、10‘11M、 10。9M、10’7M、10‘6M以及10—5M。2、不同浓度西罗莫司的作用：每组西罗莫 司的终浓度分别为0(对照组)、0．1ng／ml、lng／ml、10ng／ml、100ng／ml，共五 组。3、地塞米松和西罗莫司联合作用的影响：共分四组，分别为对照组(地塞 米松和西罗莫司均无)、地塞米松组(地塞米松终浓度为10’7M)、西罗莫司组 (西岁莫司终浓度为lng／m1)、联合组(同时用地塞米松和西罗莫司，两者终浓 度分别为10。7M及Ing／m1)。细胞经处理后分别于第12小时、24小时、36小时、 48小时和第60小时进行细胞计数和MTT检测。作用48小时后用3H—TdR掺入 法检测DNA合成，并用RT-PCR法检测PCNA mRNA的表达。实验结果用均 数±标准差(i±S)表示，统计分析选用方差分析，P0．05作为差异有显著 性的榆验水准。 结果：1、地塞米松的作用：地塞米松呈浓度依赖性抑制平滑肌细胞的增殖 和DNA合成，不同浓度组细胞计数和MT]7检测结果均有显著性差异，F值分 别为27．】46和19，263，P0．001；随浓度的增高，3H—TdR检测掺入值以及PCNA mRNA表达减少，差异有显著性，F值分别为5．387和15．407，P0．001。2、 西罗莫司的作用：西罗莫刮能够抑制平滑肌细胞的增殖和DNA合成，不同浓 度组细胞训数和MTT检测结果均有显著性差异，F值分别为41．629和21．152， P0．001：随浓度的增高，3H—TdR检测掺入值以及PCNAmRNA表达减少，差 ¨ 地褒米松和西罗莫司对VSMC增殖和胶原合成的影响 地褒米松和西罗莫司对VSMC增殖和胶原合成的影响 中文摘要 异有显著性，F值分别为7．252和195．491，尸O．001。3、地塞米松和西罗莫司 联合应用的作用：两者联合应用对平滑肌细胞增殖及DNA合成有协同作用， 细胞计数和MTY检测结果两者之间有交互作用，F值分别为5．906和9．998，P 0．05；3H—TdR掺入值以及PCNA mRNA检测两者的交互作用也有显著性，F 值分别为4．916和4．834，P0．05。 结论：地塞米松和西罗莫司能够剂量依赖性抑制平滑肌细胞增殖和DNA 合成，两者联合应用具有协同性。 第三节地塞米松和西罗莫司对活化巨噬细胞上清液 刺激后的平滑肌细胞增殖的影响 目的：应用活化巨噬细胞培养上清液(AMS)刺激体外培养的大鼠平滑肌 细胞，观察地塞米松和西罗莫司以及两者联合应用对AMS诱导的平滑肌细胞 增殖的影响。 材料和方法：实验分组同本章第二节，每组细胞培养液中分别加入体积百 分比为50％的AMS，并按实验设计进行药物干预，干预48小时后用MTT法检 测细胞增殖，并用RT-PCR法检测PCNAmRNA的表达。统计分析同前。 结果：1、地塞米松的作用：地塞米松呈浓度依赖性抑制AMS诱导的平滑 肌细胞增殖，不同浓度组MTT检测以及PCNAmRNA表达结果有显著性差异， ，值分别为29．397和16．341，P0．001。2、西罗莫司的作用：西罗莫司能够抑 制AMS诱导的平滑肌细胞增殖，呈浓度依赖性，MIT检测以及PCNA mRNA 表达结果经方差分析均有显著性差异，F值分别为28．097和17．204，P0．001。 3、地塞米松和西罗莫司联合应用的作用：两者联合应用对AMS诱导的平滑肌 细胞增殖有显著抑制作用，上述检测方法所得结果经析因设计的方差分析两者 间交互作用有显著性，MTT检测以及PCNAmRNA表达结果F值分别为14．797 和16．843，P0．01。 结论：地塞米松和西罗莫司能够剂量依赖性抑制AMS诱导的平滑肌细胞 增殖，