前列腺素EP3受体剪接体亚型在胆管细胞癌细胞增殖、迁移和侵袭中的作用以及上调β-Catenin蛋白表达的分子机制研究-病理学与病理生理学专业论文.pdf.docxVIP

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2019-01-15 发布于上海
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前列腺素EP3受体剪接体亚型在胆管细胞癌细胞增殖、迁移和侵袭中的作用以及上调β-Catenin蛋白表达的分子机制研究-病理学与病理生理学专业论文.pdf

南京医科大学博士学位论文目录南京医科大学博士学位论文目录中文摘要 1 Abstract：．．4 前言月U舌．．1／一一、材料与方法．1 O 二、结果．30 三、讨论 6 1 四、结论．74 参考文献．75 文献综述．92 攻读学位期间发表文章情况 116 致谢 11 7 万方数据南京医科大学博士学位论文前列腺素EP3受体剪接体亚型在胆管细胞癌细胞增殖、迁南京医科大学博士学位论文前列腺素EP3受体剪接体亚型在胆管细胞癌细胞增殖、迁移和侵袭中的作用以及上调p-Catenin蛋白表达的分子机制研究中文摘要研究背景：前列腺素E2(Prostaglandin E2，PGE2)是环加氧酶COX-2转化花生四烯酸的产物，是一种炎性介质，可促进多种肿瘤细胞的生长与侵袭，其中包括胆管细胞癌。 PGE2可以与四种EP受体(E pmstanoid receptor，EPR)结合，分别为EPl，EP2， EP3和EP4受体，从而影响着肿瘤细胞的增殖、迁移和侵袭。EP3受体有EP3．4， EP3．5，EP3．6，EP3．7和EP3．8 5种剪接体亚型。我们前期的研究发现胆管细胞癌细胞系CCLPl和HuCCTl细胞主要表达EP3．4，EP3．5，EP3．6和EP3．7四种 EP3受体亚型。然而对于通过EP3受体各亚型影响胆管细胞癌的生物学行为的作用和具体机制尚不清楚。 I]-Catenin是粘连蛋白的一种，主要介导细胞的粘附，并在肿瘤发生发展过程中起着重要的作用。本课题组的前期研究结果表明，PGE2通过EP3受体可以显著地增强胆管细胞癌细胞的增殖与侵袭能力，在此工作基础上，我们进一步分析了EP3受体亚型在胆管细胞癌中的作用以及PGE2促进胆管细胞癌细胞增殖、迁移和侵袭能力的分子机制。研究目的： 1．阐明EP3．4、EP3．5、EP3．6和EP3．7受体在胆管细胞癌细胞增殖、迁移和侵袭中的作用。 2．阐明PGE2通过EP3．4受体上调13-Catenin蛋白的相关机制与信号转导通路。研究内容： 1．在胆管细胞癌CCLPl、HuCCTl细胞和HEK 293T细胞中，过表达转染EP3．4，万方数据南京医科大学博士学位论文EP3．5，EP3．6和EP3．7受体亚型。南京医科大学博士学位论文 EP3．5，EP3．6和EP3．7受体亚型。 2．研究EP3-4，，EP3．5，EP3—6和EP3．7受体亚型过表达，在促进胆管细胞癌细胞增殖、迁移和侵袭中的作用。 3．研究PGE2通过EP3-4受体上调13-Catenin蛋白的信号转导通路及相关机制。研究方法： 1．运用常规细胞培养方法，培养胆管细胞癌细胞系CCLPl、HuCCTl细胞和人胚肾细胞HEK 293T细胞。 2．应用Real．time PCR实验分析转染EP 3受体细胞以及其通路中相关蛋白的 mRNA水平的变化。 3．运用Western blot实验检测细胞过表达转染EP3．4，EP3．5，EP3．6和EP3．7受体亚型的转染效率。 4．运用WST实验，检测EP3受体激动剂(sulprostone)对过表达转染EP3．4， EP3．5，EP3．6和EP3．7受体的CCLPl、HuCCTl和HEK 293T细胞增殖能力的影响。 5．运用Transwell实验检测sulprostone对过表达转染EP3．4，EP3．5，EP3．6和 EP3．7受体的CCLPl、HuCCTl和HEK 293T细胞迁移和侵袭能力的影响。 6．对信号转导通路中的一些关键靶点，采用化学抑制的方法，结合Westernblot 等实验结果分析信号转导通路。研究结果： 1．在空载质粒对照转染、过表达转染EP3。4、EP3．5、EP3。6和EP3．7受体的CCLPl 细胞系中，sulprostone上调细胞增殖能力分别至122％，145％，136％，120％和97％，上调细胞迁移能力分别至149％，224％，193％，138％，101％，上调细胞侵袭能力分别至129％，204％，193％，120％，96％。在HuCCTl和 HEK 293T细胞也见到类似的结果。 2．以空载质粒转染的CCLPl细胞为对照，在过表达转染EP3．4，EP3．5，EP3．6 和EP3．7受体的CCLPl细胞系中，13-Catenin蛋白水平的表达分别为上升至 134％，126％，102％，103％。在空载质粒转染和过表达转染EP3．4受体的CCLPl 2 万方数据南京医科大学博士学位论文细胞中，PGE2诱导的13-Catenin蛋白水平上调分别为143％和193％，sulprostone 南京医科大学博士学位论文细胞中，PGE2诱导的13-Catenin蛋白水平上调分别为14