个体化药学实验指导201千41013.docVIP

一、检测流程 ①富集白细胞样本。样本处理方法可参照一、（一）至（五）中的内容。 ②将待测样本、质控加入到试剂中，上机，编辑样本名称并选择基因型。某一批次的试剂第一次检测时，须加质控用于设定参数，之后的检测不需要再加质控。选择基因型时，样本选择相应的基因型，质控选择“通用” ③设备运行检测。 ④根据质控的St值关系，计算出ΔSt，依据“三、1”的内容，进行MaxSt差值上限与MinSt差值下限（在博奥客户端中，此二项为ΔSt上限、ΔSt下限）的设定。必要时，修正St值上限与St值下限等参数。 ⑤重新加载实验数据文件，进行结果的判定。 （一） 可检测样本 1、血液样本：2-3ml静脉全血(不需空腹)，使用一次性真空抽血管（EDTA抗凝紫帽管）采集，于4℃或-20℃低温保存，保存时间不宜超过24h。 2、组织样本：样本量大于0.3g（约黄豆大小），普通肌肉或肠胃黏膜等组织样本均可。使用石蜡或其他染色液处理的样本需要清除包埋剂或染色液。 3、纯化的基因组。 （二） 试剂与器材准备 1.商品名：耀金保；用于在进行SNP分析前对血液、组织标本的保存。 2.商品名：耀金分/耀金染；用于荧光染色原位杂交及染色体核型分析、化学药物用药指导时的样本分析。 3. 10×NH4Cl预处理液。处理血液样本时用于裂解红细胞。 4. 1×NH4Cl。使用注射用灭菌水，按照注射用灭菌水：预处理液=1:9的比例，将预处理液10×NH4Cl稀释为1×NH4Cl，备用。 5. 1000ul、200ul、2.5ul移液枪及枪尖，1.5ml离心管（灭菌）。 6.液氮。用于组织样本处理。 7.陶瓷研钵、研棒。用于组织样本的处理。 8.注射用灭菌水。 （三） 样本处理方法—从血液样本中富集白细胞 1.对用EDTA抗凝管采集到的临床全血样本进行编号（年、月、日、患者编号），上下颠倒混匀；取若干1.5ml离心管，并在管盖上编写序号，与抗凝管上编号一致。 2.在1.5ml离心管中加入1.2mL 1×NH4Cl预处理液。 3.取150ul混匀的临床全血，加入对应编号的1×NH4Cl预处理液离心管中。 4.上下颠倒10次，室温静置5min，此时1×NH4Cl裂解红细胞。血样与1×NH4Cl混匀后，液体颜色会逐渐变为澄清的红色。 5.室温3000rpm (或500-700g)离心5min，将上层透明红色液体吸取干净，注意避免吸走沉淀在管底的白细胞。 注：离心后管底部可见约2×2mm的白细胞沉淀，如白细胞团过小，须重复2-5步骤。 6.加入1mL1×NH4Cl（或生理盐水）彻底重悬白细胞，室温3000rpm (或500-700g)离心5min，将上层液体吸干净，注意避免吸走管底白细胞。 7.向富集有白细胞的离心管中加入50ul耀金保，反复吹打混匀。 8.室温静置20-30min，期间颠倒混匀2次，待检测。 （四）样本处理方法—组织样本处理 1.在洁净的陶瓷研钵中加入待处理组织样本，加入足量液氮。 2.使用陶瓷研棒将组织样本研磨破碎，尽量破碎组织样本的细胞结构。 3.向研钵中加入100ul耀金保，使用研棒搅动以溶解破碎的样本。 4.将溶有样本的耀金保吸取到1.5ml离心管中，待检测。 （五）样本处理方法—纯化的基因组 纯化的基因组不需要进行预处理，也不需要使用耀金保保存。可以直接加入到试剂中进行检测。 （六） 上样 1、根据需要检测的基因位点，取出相应耀金分/耀金染试剂，并将样本编号标注在试剂管盖上；如果试剂粘附在管壁或者上盖，需要离心，保证检测体系完整。 2、向相应编号的耀金分试剂中加入1.5ul处理后的白细胞样本（加样时应再次混匀，枪头在管内液体中间吸足样本，加入量过少会直接影响结果）； 3、盖紧管盖，短暂离心，上机检测。 （七） 软件运行（以天隆仪器客户端作为演示） 1、打开检测仪器电源，仪器进行自检运行；双击点开“个体化药学服务平台”分析软件； 2、在提示框中的“温控实验项”选择待检基因类型组别；在“基因位点项”选择该次检测的SNP位点。点右下角“选择”按钮进行下一步。 每一个基因组里的SNP位点可同批次进行检测（各基因位点在打开软件之后的“样本设置”界面的“基因类型”下拉框中选择） 3、对待检标本进行设置 （1）点击“新建”按钮，或在“文件”选项里的“新建”，弹出保存对话框，设置文件名和保存路径。（也可以不点击新建，在进行样本设置过程中会自动弹出保存对话框，设置并保存后不再提示。） （2）按照位置从A1开始的顺序，在“名称”栏对待检样本进行编号。在“基因类型”栏选取该标本待检的基因名称。选择基因型时，样本选择相应的基因型，质控选择“通用”。 4、点击右上角“开始”按钮（三角图形），开始运行检测。 5、检测运行完成后。软件“数据分析”界面给出基因型分析结果。 注意事项：