第2章氨基酸与蛋白质的都一级结构.ppt

第二章 氨基酸与蛋白质的一级结构（5学时）;蛋白质种类与功能的多样性 1010-1012;第一节 氨基酸;（一） ?-氨基酸的结构通式;(二)常见的标准AA－20种;脂肪族氨基酸;芳香族氨基酸－3种;杂 环 族 氨 基 酸;Gly;;3，按R基的极性性质;POLAR;-;特殊氨基酸;二、非标准氨基酸;三、氨基酸的旋光性和构型; 20 种天然氨基酸除甘氨酸外，都带一个不 对称碳原子—α碳原子，都有光学异构体（镜映 体）。 已知 19 种天然氨基酸均为 L－型氨基酸。 比旋光度[α]D25(单位浓度、单位长度下的旋光度，＝α/c*l)是氨基酸的重要物理常数之一，是鉴别各种氨基酸的重要依据 。　 ;四 氨基酸的酸碱性质;COOH;此氨基酸在 pH 2 或 9 附近，有缓冲作用。;;赖氨酸的解离及等电点计算;等电点(isoelectric point,pI)：分子呈电中性时溶液的pH值。为兼性离子两侧解离基团的算术平均值。 中性氨基酸：酸性和碱性基团的算术平均值： pI = (pK’-COO- + pK’-NH2 )/2， pI～6 酸性氨基酸：两个酸性解离基团的算术平均值pI = (pK’-COO- + pK’R-COO- )/2 ， pI～2 碱性氨基酸：两个酸性解离基团的算术平均值pI = (pK’-NH2+ pK’R-NH2 )/2 ， pI7 ;不同pH值时所带电荷;补充：化学性质;除Pro生成黄色化合物外,其它AA生成蓝紫色化合物（570nm）; ;补充：特征光吸收;补充：含氮量稳定;第二节、氨基酸的分离分析;分配层析的一般原理;一）纸层析;; 第三节 肽（peptide）;在多肽链中，氨基酸残基按一定的顺序排列，这种排列顺序称为氨基酸顺序。 方向性：一条多肽链有两个末端，自由?-氨基，称为氨基端或N-端；游离?-羧基，称为羧基端或C-端。 氨基酸的顺序：N-端→C-端 如上述五肽可表示为：Ser-Val-Tyr-Asp-Glu 丝氨酰缬氨酰酪氨酰天冬氨酰谷氨酸;二、肽的理化性质;;3. 具有旋光性。这是由于肽中有不对称C原子存在。 4.具双缩脲颜色反应（三肽以上）。 双缩脲（H2N-CO-NH-CO-NH2）是两分子的尿素经加热失去一分子NH3而得到的产物。 肽和蛋白特有，氨基酸无。一般含有两个或两个以上肽键的化合物与CuSO4碱性溶液都能发生双缩脲反应，生成紫红色或蓝紫色的复合物。 用途：测定肽或蛋白质含量。;三、天然存在的重要多肽; CO-NH-CH-CO-NH-CH2-COOH; 第四节、蛋白的分离;一）盐析法：溶解度不同;■ 蛋白质溶解度和pH值及盐浓度有关;Aggregate;不同蛋白的溶解度曲线;二）凝胶过滤法：分子量不同;■ 凝胶颗粒;小分子进入凝胶分子内，被滞留;问 题：已知下列蛋白的分子量。问以凝胶过滤法洗脱时蛋白质的洗脱顺序如何？（凝胶分级范围为5000～400，000）;三）亲和层析法：特定亲和力;■ 亲和层析法的作用机理：;四）蛋白电泳;SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳;;第五节 蛋白质一级结构的测定;一级结构;;二、蛋白一级结构测定;F. Sanger (1953, Cambridge U) Insulin 胰岛素 (A, B chains); 一级结构 (Primary structure);一）、Edman degradation降解法测定氨基酸顺序的一般测定步骤 ;Sanger法。2,4-二硝基氟苯在碱性条件下，能够与肽链N-端的游离氨基作用，生成二硝基苯衍生物（DNP-肽）。 酸解，得黄色DNP-氨基酸，用乙醚抽提分离。不同的DNP-氨基酸可以用色谱法进行鉴定。 ;用途：可以用来鉴定多肽或蛋白质NH2末端氨基酸.;(二) 二硫键的断裂;(三)氨基酸组成的分析： 酸，碱解后氨基酸分析仪测定;（四）　多肽链的部分水解;Trypsin ：R1=赖氨酸Lys和精氨酸Arg侧链（专一性较强，水解速度快）。;2) 糜蛋白酶;3）胃蛋白酶;2、 化学法：(Cyanogen bromide);五）氨基酸序列的测定; ;此反应可循环进行 进行n轮反应，可测出n个残基顺序 一次：60－70个残基的肽段顺序 ;(六) 肽段的次序—重叠肽法; 示例(十肽的水解); ;血红素结合部位; 通过植物、动物和微生物等数百种生物的细胞色素C一级结构的研究表明： （1）亲缘关系越近，AA顺序的同源性越大。 不同生物与人的细胞色素C相比较AA差异数目 黑猩猩 0 鸡、火鸡 13 牛猪羊 10