解淀粉芽孢杆菌抑菌物质分离和调控研究-生物学;微生物学专业论文.docxVIP

优秀毕业论文 精品参考文献资料 摘 摘 要 摘要 解淀粉芽孢杆菌(Bacillus amylo脚uefaciens)是芽孢杆菌属中的一个种， 具有较强的次级代谢产物的生产能力，可以产生多种抑菌相关的代谢产物。依 据合成方式的不同，由芽孢杆菌产生的抑菌物质可分成两大类，一是核糖体途 径合成前体，然后通过翻译后修饰而形成的抑菌肽；二是非核糖体途径合成的 抑菌肽。解淀粉芽孢杆菌NK 1 0．BAhjaWT(B．amylo砌uefacien$strain NKl0．BAhjaWT)是本实验保藏的一株细菌，它含有多种抑菌相关的次级代谢产 物，对真菌和细菌都具有强烈的抑制作用，具有实际应用的潜力。所以对其抑 菌产物进行分离鉴定，具有十分重要的应用价值。 另一方面，随着解淀粉芽孢杆菌FZB42全基因组测序的完成，人们对其抑 真菌／细菌能力的研究也深入到了分子水平。本研究利用Mini．Tnl0随机转座插 入系统筛选出了一些能够影响解淀粉芽孢杆菌NK 10．BAhjaWT抑菌物质产生的 基因。通过Real．time PCR，肠cZ报告基因的表达测定，Western blot等技术对这 些基因涉及的调控关系进行了研究。为今后完整揭示抑菌物质的合成和调控途 径打下了一定的基础。 通过这两方面的努力，本研究得到如下结论： 1．使用酸沉淀和HPLC等分离手段，从解淀粉芽孢杆菌的突变株IA中分 离到一种产量提高较多的物质，经MALDI．TOF MS检测之后，确认其分子量大 小为3399．8 D，并且可以专一抑制革兰氏阳性细菌。PCR检测显示该株解淀粉 芽孢杆菌中含有抑菌物质SubtilosinA的结构基因sboA，同时sboA在IA中的转 录提高，结合3399．8D的分子量和这种抑菌物质的抑菌特点，我们推断分离得到 的物质为Subtilosin A。 2．利用Mini．Tnl0随机插入系统建立解淀粉芽孢杆菌Ⅵ的突变库，筛选 到citB基因突变的菌株抑真菌能力显著下降。citB基因发生突变后，编码产物不 能正常催化柠檬酸向异柠檬酸的转化，导致谷氨酸合成的前体a．酮戊二酸缺少， 摘 摘 要 谷氨酸合成降低，促进了TnrA对全局调控因子DegU的P2启动子的激活，导 致DegU表达和磷酸化水平增加，最终抑制了抑真菌能力。但Subtilosin A专一 抑制革兰氏阳性细菌，citB基因的突变对其没有影响。 3．利用M“．Tnl0随机插入系统建立解淀粉芽孢杆菌wT的突变库，筛选 到purL基因突变的菌株抑细菌能力显著提高。通过研究我们发现，purl基因的 突变导致了TPP(焦磷酸硫胺素)合成的减少，同时也抑制了abrB基因的表达， 缺少了AbrB的抑制作用，sboA基因大量表达，抑细菌的SubtilosinA合成增多， 突变菌株抑细菌能力增强。表明purL基因的突变可以通过直接或间接地影响 abrB基因的表达，导致Subtilosin A合成的增加。 关键词： 解淀粉芽孢杆菌，SutilosinA，基因citB，基因purL Il AbstractAbstract Abstract Abstract The Bacillus amyloliq7uefaciens strains have potential to produce many antibiotics with a variety of structure．Principally,there al e two different biosynthetic pathways for antibiotics peptides：(i)the non—ribosomal synthesis of peptides by large megaenzymes，the non—ribosomal peptide synthetases(NRPSs)and(ii)the ribosomal synthesis of linear precursor peptides that are subjected to post-translational modification and proteolytic processing．The B．amyloliquefaciens strain NKl 0．BAhjaWT,stored in our lab，could synthesize diverse secondary metabolites that have abilities against fungal or bacterial strains．Due to its potentials as antibiotics， it is important to isolate and identi