《HK基因综述》-课件设计（公开）.pptVIP

HK基因综述 许秀竹 2009.11.13 * * 为了了解HK基因目前的研究状况和HK基因研究的主要方法，下面介绍目前国内外对于HK基因的研究情况。 所有的工作主要集中在三个方面：HK基因的检测，HK基因的功能和性质还有HK基因的主要应用。 现在 对目前已有研究工作做一个总体介绍。 * * 聚合酶链反应(Polymerase Chain Reaction ,PCR) 技术介绍： 是80年代中期发展起来的体外核酸扩增技术。它具有特异、敏感、产率高、快速、简便、重复性好、易自动化等突出优点；能在一个试管内将所要研究 的目的基因或某一DNA片段于数小时内扩增至十万乃至百万倍,使肉眼能直接观察和判断；可从一根毛发、一滴血、甚至一个细胞中扩增出足量的DNA供分析研 究和检测鉴定。过去几天几星期才能做到的事情，用PCR几小时便可完成。PCR技术是生物医学领域中的一项革命性创举和里程碑。 * * RT—PCR（ Reversed Transcript PCR ）是一种将cDNA合成与PCR技术结合分析基因表达的快速灵敏的方法，主要用于对表达信息进行检测或定量分析,还可以用来检测基因表达差异而不必构建cDNA文库克隆cDNA。 * * 一、检测方法的介绍： 1.对于靶基因表达数据的内部标准化，标准的基因表达的稳定性是一个基本的先决条件，但是许多所谓的假设稳定表达的看家基因（HKG）在某些实验条件下是不稳定的。文中，利用besetkeepr软件，在10个候选基因中结合它们的指数确定了最合适的标准。（指数是由另外的10个靶基因的比较来确定的。） Determination of stable housekeeping genes, differentially regulated target genes and sample integrity: BestKeeper – Excel-based tool using pair-wise correlations. Michael W. Pfaffl?, Ales Tichopad, Christian Prgomet Tanja P. Neuvians（2003） * * 2. 使用实时反转录PCR（RT-PCR）技术评估来自健康个体和结核病患者的周围单核血细胞和全血中的13个HK基因的表达水平。通常使用的HK基因没有任何一个可以作为合适的内部参，因为它们的变化很大（34倍最大变化）对于人类肺结核病的标准化mRNA水平，RNA特定的人类酸性核糖体蛋白是最稳定的HK基因。 Validation of housekeeping genes for normalizing RNA expression in real-time PCR。 Keertan Dheda1, Jim F. Huggett1, Stephen A. Bustin2, Margaret A. Johnson1, Graham Rook1, and Alimuddin Zumla1 （2004） * * 3.使用DNA微阵列技术，在前列腺癌和结肠癌基因模型系统中某些HKG的表达水平能检测到变化。对于在相似类型的癌症，化疗反应，确定疾病标志的分类变化，微阵列技术和定量PCR的高通量差异表达分析是一个共同的平台。 Housekeeping genes in cancer : normalization of array data。 Anis H. Khimani1, Abner M. Mhashilkar2, Alvydas Mikulskis1, Michael O’Malley1, Jennifer Liao2, Eva E. Golenko1, Pat Mayer1, Sunil Chada2, Jeffrey B. Killian1, and Steven T. Lott1（2005） * * 4.植物应激研究越来越多的基于基因表达。对于低丰度mRNA的检测，实时RT-PCR技术是目前最灵敏的技术。为了避免偏差，实时RT-PCR用到一个或几个内部控制基因，他们在治疗期间没有波动，在生物和非生物应激期间用geNorm软件在马铃薯类植物中检测到的七个非调控的HKG。三个实验条件的结果表明：在测试的7个基因中， ef1α是最稳定的。其它HKG的表达根据不同应激各不相同。 Housekeeping gene selection for real-time RT-PCR normalization in potato during biotic and abiotic stress. Nathalie Nicot, Jean-Francxois Ha