基于真菌漆酶作用机制的结构改造及改性漆酶降解有机磷毒物的研究-药物化学专业论文.docxVIP

优秀毕业论文 精品参考文献资料 河北医科大学 河北医科大学 学位论文使用授权及知识产权归属承诺 本学位论文在导师(或指导小组)的指导下，由本人独立完成。本学 位论文研究所获的研究成果，其知识产权归河北医科大学所有。河北医科 大学有权对本学位论文进行交流、公开和使用。凡发表与学位论文主要内 容相关的论文，第一署名单位为河北医科大学，试验材料、原始数据、申 报的专利等知识产权归河北医科大学所有。否则，承担相应的法律责任。 0：j．j羹I ，jj：“。∥ 研究生签名：罗勿新弛痞酝兰辫曦i、、j 29tS簪-砖扫j≥≥目 河北医科大学 研究生论文独创性声明 本论文是在导师指导下进行的研究工作及取得的研究成果，除了文中 特别加以标注等内容之外，文中不包括其他人已经发表或撰写的研究成 果，指导教师对此进行了审定。本论文由本人独立撰写，文责自负。 研究生签名： 冯锣 导师签章：詹夏毳 ／ 2护咕年l， 月 ≥ 日 万方数据 目 目 录 1㈣8㈥47Y27 0洲6 中文摘要 】 英文摘要 4 英文缩写 8 研究论文基于真菌漆酶作用机制的结构改造及改性漆酶降解 有机磷毒物的研究 引言 9 第一部分基于分子模拟技术研究真菌漆酶的催化氧化机制 日U舌 22 材料与方法 ．．22 结果 24 附图 ．．27 附表 ．．37 讨{仑 38 小结 39 参考文献 ．．40 第二部分真菌漆酶在介质体系中降解有机磷毒物的规律和作用机制 —1￡．—j一 月IJ舌 42 材料与方法 ．．42 结果 ．．44 附图 ．．46 附表 ．．50 讨{仑 5 l 小结 53 参考文献 ．．54 第三部分真菌漆酶的结构改造及突变漆酶理论模型的构建 —1L—L 月U舌 57 材料与方法 ．．57 结果 ．．58 附图 ．．60 万方数据 附表 ··73 附表 ··73 讨论 ··74 小结 76 参考文献 ··77 第四部分理论预测突变后变色栓菌漆酶降解有机磷毒物的效果 前言刚吾 ‘／979 材料与方法 ··79 结果 80 附图 ··83 附表 90 讨{仑 91 小结 92 参考文献 ··93 第五部分利用酵母表达系统制备P391A突变漆酶 前言日lJ吾 94 材料与方法 ··94 结果 96 附图 ··98 讨论 ·101 ／J、结 ·101 参考文献 102 结论 103 综述漆酶的研究及其在化学灾害事故救援中的应用前景 104 致谢 112 个人简历 113 万方数据 中文摘要基于真菌漆酶作用机制的结构改造及改性漆酶降解 中文摘要 基于真菌漆酶作用机制的结构改造及改性漆酶降解 有机磷毒物的研究 摘 要 目的： 1通过研究真菌漆酶复合物中酶与配体的相互作用，进一步揭示其催 化氧化机制。 2基于降解实验数据探索真菌漆酶降解有机磷毒物的规律和作用机 制。 3改造漆酶并预测改性漆酶降解有机磷毒物的效果，通过实验制备理 论预测效果好的改性漆酶。 方法： 1从5个己知的真菌漆酶复合物的晶体结构出发，利用分子模拟技术 和能量优化方法，研究其在晶体结构和非晶体状态下酶与配体的相互作 用，在分子水平进一步揭示其催化氧化机制。 2基于文献报道的降解实验研究总结反应规律，并利用分子模拟技术 和分子对接方法探索真菌漆酶降解有机磷毒物的机制。 3在漆酶作用机制研究的基础上，提出漆酶的分子改造策略，利用同 源建模方法构建不同点突变漆酶的空间结构模型。 4利用分子模拟技术和分子对接方法，理论预测改性漆酶降解有机磷 毒物的效果。 5利用酵母表达系统制备理论预测效果好的改性漆酶。 结果： 1在1KYA中与底物发生疏水作用的氨基酸残基主要有Phel62、 Leul64、Phe265、Pr0391和Gly392，在2HRG中的主要有Vall62、Phe33 1、 Pr0390和Gly391，在3FU7、3FU8和3FU9中的主要有Alal91、Pr0192、 Phe371、Phe427、Leu429。此外，底物结合到漆酶活性口袋后，其结构中 富含电子的基团贴近其中保守的组氨酸，并且几乎总是与之形成氢键。 2真菌漆酶与介质组成的漆酶介质体系可以有效降解一类具有V类 神经毒剂结构特征的有机磷毒物，其中漆酶总是白腐菌漆酶，而介质是影 万方数据 中文摘要响催化效率的重要因素。有机磷毒物中处在连接硫原子的 中文摘要 响催化效率的重要因素。有机磷毒物中处在连接硫原子的p位碳原子上的 氮原子具有十分重要的地位，它很可能在反应中首先失去电子。在中性溶 剂中，它可能被氧化生成N．氧化物，这在水溶液中是稳定的，但当存在 有机溶剂时则会发生竞争性的分解反应。 3本研究利用MOE-Dock模块提供的分子对接功能探索真菌漆酶与 底物对接的优化条件发现：将分别在Amber99力场和MMFF94x力场中 进行加氢处理的酶和