基于超分子组装体的生物分子荧光检测方法研究-高分子化学与物理专业论文.docxVIP

优秀毕业论文 精品参考文献资料 摘要摘 摘要 摘 要 荧光传感器因其灵敏度高、不损坏样品、使用方便，在检测中的应用越来越 广泛。本文将超分子作用应用到荧光传感器的连接部分，通过非共价作用将识别 部分与报告部分连接起来，构建以生物分子荧光检测为目的的超分子组装体。采 用非共价连接取代复杂的有机合成，不仅可有效拓展组装单元的范围，简化体系 的制备和优化过程，而且可丰富基于组装与解助装的检测方法。研究由此采用不 同组装单元通过不同非共价作用构建了一系列超分子组装体，探索了基于超分子 组装体解组装特性和基于超分子组装体结构转变特性的多种生物分子荧光检测 方法。 1．本研究首先以1一芘甲醇的羟基为起始基团，通过环氧乙烷的阴离子聚合， 制备得到具有良好水溶性的聚环氧乙烷修饰的的芘(PEO．Py)两亲分子，拓展 了疏水性芘荧光探针在水相检测中的应用范围。系统的紫外和荧光光谱研究结果 显示，在两亲性PEO．Py中加入金纳米粒子，可通过疏水作用在金纳米粒子表面 有效吸附PEO．P)，两亲分子，通过能量共振转移实现荧光淬灭。加入巯基分子后， 巯基分子与金更强的作用力可以取代两亲性聚合物，使荧光恢复。系统的定量化 实验显示，这种荧光恢复过程可实现含巯基氨基酸半胱氨酸的高灵敏检测。其中 金纳米粒子对芘荧光的淬灭程度会影响到检测灵敏度，在淬灭程度为20～30％时 会达到最好的检测效果。半胱氨酸荧光法检出限可达到11．4 I蝴，并具有良好的 选择性。两亲性聚合物对金纳米粒子良好的稳定作用赋予体系良好的稳定性，可 以用于检测血清中全部巯基分子的含量，回收试验验证了体系具有良好的准确性 和可靠性，具有潜在的临床应用价值。 2．通过静电和疏水作用，构建了带负电的多糖肝素分子与带正电表面活性 剂的复合组装体系，疏水内腔可以包埋荧光探针芘。荧光光谱实验结果显示，通 过多糖肝素分子和十六烷基三甲基溴化铵(CTAB)的静电复合作用，可以在单 纯CTAB临界胶束浓度以下获得具有强芘荧光发射的超分子组装体。在该体系中 加入与肝素有特异性作用的蛋白，可破坏肝素分子和CTAJ3组装体，释放疏水探 针芘，显著降低芘荧光发射强度。系统的定量化实验显示，这种荧光降低过程可 实现对与肝素有特异性作用的鱼精蛋白与耵盯多肽的高选择性荧光检测。 3．研究以越E分子特殊的聚集诱导发光机制和核酸适配体的高选择性作用 IU 浙江大学博士学位论文为依据，采用荷正电的聚集诱导发光 浙江大学博士学位论文 为依据，采用荷正电的聚集诱导发光(灿E)分子与荷负电的核酸适配体的静电 组装，制备了具有鲇E分子荧光发射能力的超分子组装体。圆二色谱研究显示， 在该超分子组装体中加入汞离子，可诱导富含胸腺嘧啶的核酸适配体与汞离子作 用，使核酸适体的构象发生改变，触E探针分子聚集程度进一步增大，荧光强度 增加。这种荧光增强过程可用于检测汞离子，检出限为0．22 pM。进一步引入与 汞离子有更强作用的巯基分子，可恢复核酸适配体的结构，降低mE荧光强度。 利用这一过程可实现巯基分子谷胱甘肽的检测，检出限达到O．15 pM，并具有良 好的选择性。利用趾E分子与核酸适配体超分子组装体结构的这种双转变过程， 可实现对汞离子和巯基分子谷胱甘肽的双检测。 4．研究进一步将超分子主客体组装特性应用到基于荧光纳米量子点的生物分 子检测体系中。通过在量子点表面共价键合p．环糊精，将量子点的荧光性能与p． 环糊精的识别作用结合起来，获得了具有主客体组装功能的水溶性量子点。荧光 光谱实验显示，对硝基苯酚进入p．环糊精空腔内的超分子组装过程，可通过电子 转移有效淬灭量子点荧光。通过系统对照试验，发现其淬灭机制是酚羟基与硝基 协同作用的结果。将对硝基苯酚的羟基通过磷酸根保护起来的对硝基苯磷酸二钠 不能达到对量子点荧光的有效淬灭． 基于对硝基苯磷酸二钠与对硝基苯酚对量子点不同的淬灭效应，研究采用p． 环糊精表面接枝的水溶性量子点与硝基苯磷酸二钠复合组装，成功构建了碱性磷 酸酶活性的检测体系。在该体系中，普通的生物分子不会对量子点荧光产生影响， 而当该组装体和以磷酸根为特异性底物的磷酸酶接触时，可诱导磷酸根转化为羟 基，实现量子点荧光淬灭。该特异性荧光淬灭现象可实现对碱性磷酸酶活性的生 物荧光检测，检出限可以达到10 mU／nlL。 关键词：荧光传感器，超分子组装体，解组装，结构改变 Ⅳ ABS下 ABS下RACT ABSTRACT Fluorescence sensors have at仃-acted much intereSt in biosensing印plications due t0 its m曲sensitivi饥non·inVasion to me：s锄ple aIld conVeIlience．Selforgalli2ation