以γ-[18o4]-atp说为探针研究阿尔兹海默疾病四中tau蛋白的过度磷酸化.docx

摘要摘要 摘要 摘要 阿尔兹海默病(Alzheimer’S disease，AD)俗称老年痴呆症，是人体大脑的记 忆、推理、语言功能受损的一种神经退行性疾病，也是老龄人口中发病率最高的 疾病之一，严重的可能会导致死亡。虽然AD的发病机理还未有确定的说法，但 其主要的两个病理特征分别为：1．神经细胞外p．淀粉蛋白(Ap蛋白)沉积形成的 老年斑(senile plaques，SP)，2．神经细胞内Tau蛋白的过度磷酸化形成的神经 纤维缠结(Neurofibrillary Tangles，NFTs)。目前，以Ap蛋白为靶点进行的临床 药物试验多数以失败告终，所以越来越多的研究者开始转向Tau蛋白的研究。Tau 蛋白是一种微管结合蛋白，其翻译后修饰形式多样，包含磷酸化、糖基化、酰基 化和泛素化等。本论文主要从Tau蛋白的过度磷酸化方向进行研究，提出了以 ATP的稳定同位素类似物^r．[1804]．ATP为探针，以低温诱导为手段开启神经细胞 Tau蛋白过度磷酸化的进程，发展基于质谱技术的检测手段。 为了完成原位输送丫．【1s04】．ATP，本论文第二章对脂质体的制备方法进行了 研究，将制备的脂质体平均粒径、表面电位以及包封效率进行了表征，提出了一 种操作简单的脂质体制备方法。由于诱导Tau蛋白过度磷酸化方法多种多样，本 论文第三章提出了一种直接30℃低温诱导Tau蛋白的过度磷酸化的方法，从而 构建AD的病理模型。基于上两章的研究基础，本论文第四章设计了两种研究方 案：1．通过脂质体包封丫．[1s04】_ATP为手段输送进入细胞，以质谱技术为主要表 征方法，对照Tau蛋白生理与病理模型的磷酸化情况，系统、全面地研究与疾病 相关的过度磷酸化位点；2．为了系统地解析多位点磷酸化间的调控关系，跟踪磷 酸化的动态变化，通过在细胞裂解物中直接加入Y．[1804]．ATP的方法，利用 Nano-LC—MS表征，建立全新的数学模型和数据处理方法，系统、定量地研究Tau 蛋白过度磷酸化位点的相互调控、跟踪其动态变化，推进对AD病因的认识。 关键词：阿尔兹海默病；丫．【1804]-ATP：Tau蛋白；过度磷酸化；纳升级液相 色谱质谱联用 万方数据 AbstractAbstract Abstract Abstract Alzheimer’S disease(AD)is a neurodegenerative disease because of the human brain’S memory，reasoning，language impairment，and it is likely to OCCUr in aging population,even may lead to death．At present，AD’S pathogenesis is still unclear，but there are two main pathological features：the first，outside nerve cell show that fl-amyloid protein(Ap protein)deposited and formed senile plaques(SP)．Second， inside nerve cells show that tau protein hyperphosphorylation and formed neurofibrillary tangles(NFTs)．The most of clinical drug experiments with Ap protein aS the target had failed，therefore more and more researchers are turning to study tau protein．Tau protein is a microtubule binding protein，it has various post·translational modification,including phosphorylation，glycosylation,acylation，ubiquitination and SO on．In this paper，we mainly researched from tau protein hyperphosphorylation and proposed丫-【1804】-ATP as a probe，which is a stable isotope marker with high purity of ATP,hypothermia·induced means to open process of tau