基因工流程2目标基因分离.pptVIP

Forward Genetics is an approach that encompasses several means of identifying the gene or set of genes that are responsible for a particular phenotype within an organism. Initially, this entailed the generation of random mutations in an organism, often through radiation, and then through a series of breeding of subsequent generations, isolating individuals with an aberrant phenotype. Today there are many different means of following the general path of altering the genotype to observe the phenotype, several of which within the genomic era can be useful in the study of functional genomics. Reverse genetics is an approach to discovering the function of a gene by analyzing the phenotypic effects of specific gene sequences obtained by DNA sequenceing. 反向遗传学是相对于经典遗传学而言的。经典遗传学是从生物的性状、表型到遗传物质来研究生命的发生与发展规律。反 向遗传学则是在获得生物体基因组全部序列的基础上，通过对靶基因进行必要的加工和修饰，如定点突变、基因插入\缺 失、基因置换等，再按组成顺序构建含生物体必需元件的修饰基因组，让其装配出具有生命活性的个体，研究生物体基因组的结构与功能，以及这些修饰可能对生物 体的表型、性状有何种影响等方面的内容。与之相关的研究技术称为反向遗传学技术。 二、图位克隆（Map-based cloning）法（未知序列的基因克隆） 图位克隆方法，这种方法又称定位克隆（positoinal cloning），1986年首先由剑桥大学的Alan Coulson提出。用该方法分离基因是根据功能基因在基因组中都有相对较稳定的基因座，在利用分离群体的遗传连锁分析或染色体异常将基因伫到染色体的1 个具体位置的基础上，通过构建高密度的分子连锁图，找到与目的基因紧密连锁的分子标记，不断缩小候选区域进而克隆该基因，并阐明其功能和疾病的生化机制。 图位克隆方法分离基因的优点是无需预先知道基因的DNA顺序，也无需预先知道其表达产物的有关信息。 SSH 实例1：分离耐低磷基因 SSH 实例2：分离螟虫特异性表达基因 通过SSH的方法分离到螟虫诱导性的启动子 Yeast two-hybrid system 实例 九、功能基因组研究与大规模 T-DNA插入突变体库的构建 （扩展内容） 人类基因组（HGP）计划 1984.12 犹他州阿尔塔组织会议 1985 Dulbecco在《Science》撰文 “肿瘤研究的转折点:人类基因组的测序” 。美国能源部(DOE)提出“人类基因组计划”草案 1987 美国能源部和国家卫生研究院（NIH）联合为“人类基因组计划”下拨启动经费约550万美元 1989 美国成立“国家人类基因组研究中心”，Watson担任第一任主任 1990.10 美国国会批准，人类基因组计划正式启动 1992.6 Craig Venter离开NIH，建立基因研究所（TIGR）。 TIGR从流感嗜血菌(H. inf)开始进行细菌基因组测序。 1995 TIGR完成第一个自由生物体流感嗜血菌(H. inf)的全基因组测序。 1998.5 Craig Venter成立公司（即后来的Celera公司），计划用全基因组霰弹法对人类基因组进行测序 1999.7 第5届国际公共领域人类基因组测序会议，加快测序速度 1998 公共组完成人类基因组计划的物理作图，开始人类基因组的大规模测序 2000.6.26 公共组和Celera公司共同宣布完成人类基因组工作草图 2001.2.15 《Nature》刊文发表国际公共领域结果 2001.2.16 《Science》刊文发表Celera公司及其合作者结果 Public s