肚倍蚜适应单宁环境机理的初步研究-农业昆虫与害虫防治专业论文.pdf.docxVIP

肚倍蚜适应单宁环境机理的初步研究中文摘要 肚倍蚜适应单宁环境机理的初步研究 中文摘要 肚倍蚜点，口6“，．昭衄砌嬲fco肠Takagi隶属于半翅目HeIIliptera蚜总科Apllidoidea 瘿绵蚜科P咖phi百dae铁倍蚜属‰6”阳∥口，是一种异寄主全周期与同寄主不全周 期并存的复迁式生活周期型资源昆虫。肚倍是肚倍蚜在夏寄主上产生的虫瘿即五 倍子，其单宁含量约为70％左右(干重)，为了解肚倍蚜对虫瘿内高单宁环境的 适应机理，本研究以肚倍蚜为试验材料，研究了肚倍蚜对高单宁虫瘿环境的生理 生化反应及相关机理。主要结果如下： 1．肚倍组织切片观察及单宁含量测定 通过肚倍的切片观察，分析了肚倍蚜瘘内生活所取食的部位。结果表明，肚 倍的外壁、中层和内壁组织结构有较大差异，肚倍的外层布满非腺毛，外层的细 胞较小；肚倍中层的细胞相对较大；而肚倍内壁的细胞较小且排列松散。除组织 形态上不同外，肚倍的中层和内壁在单宁含量上也存在较大差异，肚倍的中层单 宁含量为30．O％左右，内壁为13．2％，而汁液中的含量为7．2％。肚倍蚜以刺吸的 方式吸取单宁含量较低的植物汁液，这是一种对高单宁环境的行为学适应。 2．肚倍蚜体内单宁酶的研究 研究表明，在pH值3．8～6．2范围的条件下，未发现肚倍蚜上清蛋白中具有水 解单宁的活性成分。在进一步研究中，对肚倍蚜上清液进行了纯化和分离，并对 分离的不同组分进行了单宁酶活性检测，结果表明，肚倍蚜蛋白经离子吸附所产 生三个峰中的蛋白均无单宁酶活性。 3．肚倍蚜抗氧化反应研究 为验证单宁是否对肚倍蚜具有氧化胁迫作用，本研究以春迁蚜为对照，检测 了瘿内不同时期总抗氧化能力以及超氧化物歧化酶(SoD)、过氧化氢酶(CAT)、 过氧化物酶(POD)和谷胱甘肽．S．转移酶(GST)的活性，分析了肚倍蚜体内抗 氧化系统对高单宁环境胁迫所产生的相关反应。研究表明，与对照相比，瘿内时 期肚倍蚜体内的总抗氧化活力、CAT和POD活性均显著升高；SOD和GST活性 除在有翅蚜秋迁蚜阶段与对照无差异，在其它阶段的活性均显著高于对照。试验 表明高单宁环境对肚倍蚜造成氧化胁迫作用。 4．肚倍蚜L口c．1基因全长cDNA克隆及序列分析 利用RT-PCR和RACE技术从肚倍蚜中得到了肠c．1基因2，327bp的全长 cDNA序列，该序列推定的蛋白序列由591个氨基酸残基构成。利用ProtP猢软 件分析，推测蛋白的分子量为67．3583 kDa，等电点为6．31。对氨基酸序列进行疏 华中农业大学2011届博士研究生学位论文水性分析，说明其氨基酸序列具有亲水性。基于氨基酸序列全长，对肠c—J蛋白 华中农业大学2011届博士研究生学位论文 水性分析，说明其氨基酸序列具有亲水性。基于氨基酸序列全长，对肠c—J蛋白 进行了多重序列比对，并构建了系统发育树。结果表明肚倍蚜￡口c—J基因具有很 高的保守性，含有典型的铜结合蛋白结构，肚倍蚜￡口c．J『基因与豌豆蚜三口c—J基 因的同源性最高。这也证实本实验所得基因为肚倍蚜相应基因序列，并为深入了 解昆虫在抗胁迫环境下的分子适应机制奠定了基础。 5．肚倍蚜抗氧化基因和血c基因表达研究 为了解肚倍蚜中肠相关基因在高单宁环境中的相应变化，克隆了肚倍蚜的 卢彳cf砌、Ch．勋d、胁．勋d、C口f、耽和伍f基因片段，采用了荧光定量技术分析 勖．勋d、胁．肋d、C甜、取、函f和三口c．J基因在肚倍蚜中肠组织的相对表达情况。 结果表明，与对照春迁蚜相比，不同时期肚倍蚜中肠组织的C一勋d、胁-勋d、C口f、 聊、白f和三口c．J基因表达差异显著。其中，仇勘d、胁．勋d、勖f、聊和西r 所组成的抗氧化体系，在一代干雌、二代干雌和无翅秋迁蚜时期相对表达量较高， 而三口c．J基因则在无翅秋迁蚜和有翅秋迁蚜时期相对表达量较高，这验证了肚倍 蚜体内的相关基因在表达水平上对瘿内高单宁环境的应答表现，说明这些基因在 肚倍蚜适应高单宁环境中起到了重要作用。 关键词：肚倍蚜；单宁；氧化胁迫；抗氧化酶；漆酶；基因克隆；荧光定量 Ⅱ Absn·act111e Absn·act 111e du。eIlsi如rnl gall apllid，肠6“r口g妇砌淞fc0肠Tak姆(H蝴a：PeIIl蛳西dae)is aIl lmp叫姐t econo觚c msect whose non—migratory锄d mi笋atory life cycle are coeXist in’ Ⅱle du。e11si南m gallurIts are rich i11 ta]【lniIl concell仃ation which is maintained at 印proximately 70％of d巧wei出and iIlduccd by比砌淞icD肠试me蚴er