一株拮抗你细菌a2的分离 鉴定及其对小麦白粉病的防治效果.docxVIP

内蒙古师范大学硕士学位论文摘要 内蒙古师范大学硕士学位论文 摘要 本文从样品采集、菌株分离保存、活性筛选、菌种鉴定、生物学特 性、基础发酵培养基的选择、作用机理、小麦白粉病防治效果等多个方 面对分离自保护性耕作农田土样的菌株A2进行了研究。主要结论如下： (1)从保护性耕作农田采集土样，选用不同的分离培养基，采用土壤 稀释及平板划线法分离出38个单菌落：以番茄灰霉病菌和水稻稻瘟病菌 为指示菌，对峙生长法初筛获得具有拮抗作用的菌株12株。10代继代后， 重新测定活性并结合管碟法进行复筛，对指示病原菌仍具有较强抑菌作 用且较稳定的只有细菌菌株A2。 (2)室内平板对峙结果表明，菌株A2抑菌谱广，对20种病原真菌均 表现出抑制作用。但对不同的植物病原真菌抑菌效果不同；抑制率在 29．oo％---，86．00％之间，其中对番茄灰霉病菌、水稻稻瘟病菌的抑菌效 果最好，抑制率达85．6l％、81．82％；抑菌带宽平均可达17．OOmm、 15．83ram。 (3)运用形态、生理生化以及分子生物学方法对菌株A2进行了鉴定。 根据A2菌株的形态、生理生化特性以及16S rDNA的序列比对结果，鉴 定菌株A2为枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis)的一株菌株。其主要特性 为：菌体杆状，内生芽孢、芽孢卵圆形，无伴孢晶体，具鞭毛，革兰氏 染色阳性；在LB平板培养基上菌落呈淡黄色、无规则、突起、边缘不整 齐、表面粗糙有褶皱、不透明、黏性；兼性厌氧，接触酶反应、V-P 内蒙古9币范大学硕士学位论文(Vogos—Proskuer)测定为阳性、能利用柠檬酸盐生长。PCR扩增获得菌 内蒙古9币范大学硕士学位论文 (Vogos—Proskuer)测定为阳性、能利用柠檬酸盐生长。PCR扩增获得菌 株A2的16S rDNA序列全长为1437bp(GenBank序列登录号为EU567068)。 利用BLAST软件将测得的基因序列与GenBank数据库进行序列比对分析， 利用DNAMAN软件进行同源性比较和进化树绘制。结果表明菌株A2与 B．subtil括(AY881643)序列相似性最高、遗传距离最小，分别为99．7％ 和0．003，并且在系统进化树当中与枯草芽孢杆菌处于一个分支。 (4)菌株A2在牛肉膏蛋白胨培养基中生长迅速，14h即达到稳定期(28 ℃，180rpm)。最适生长pH为7，在26—35℃条件下，生长良好，最适 生长温度为28。C，较适宜的摇瓶装液比为1：10(250mL三角瓶装25mL 培养液)。50mL装液量、28。C，180rpm摇瓶培养最适基础发酵培养基配 方：蔗糖309，蛋白胨lOg，酵母膏59，KH：Po．4．59，CaCO：。29，(Nit。)：SO， 2．59，蒸馏水1000mL。 (5)在离体条件下，对水稻稻瘟、苹果树腐烂、小麦根腐、棉花枯萎 病菌菌丝生长、致畸作用等进行了研究。结果发现，菌株A2发酵上清液 对4种病菌表现出了强烈的抑制作用，平均抑菌圈直径分别为30．50mm、 30．OOmm、29．76mm、21．20mm。其中对苹果树腐烂病菌的抑制率最高83．60 ％，随着发酵上清液稀释倍数的增加，抑制作用下降。但是直到7d仍具 有20．00％以上的抑制率。证明其代谢产物也具有较强的抑菌效果。该菌 可以致使病原菌菌丝生长形态异常，出现菌丝分支加剧、膨大、生成圆 珠形囊状体和细胞质溢出而使菌丝体崩溃染色较深等现象。 (6)温室小麦活体生物测定中，菌株A2的发酵液及发酵上清液均表 现出较好的防治效果(29．00％以上)；当菌液与上清液混合(发酵液) 内蒙古师范大学硕士学位论文后其防治效果有加和作用。本文主要是研究了该菌对小麦白粉病的预防 内蒙古师范大学硕士学位论文 后其防治效果有加和作用。本文主要是研究了该菌对小麦白粉病的预防 作用，发酵原液防治效果可达72．22％，发酵上清原液也有29．24％的防 治效果。 关键词：枯草芽孢杆菌；分离筛选；鉴定；作用机理；防治效果 内蒙古9币范大学硕士学位论文AB 内蒙古9币范大学硕士学位论文 AB STRACT ’Ihe dissertation describes the isolation of a Bacillus strain A2 from the soil of protected farmland，as well as the identification of the strain based on its morphological，physiological characteristics and the homological analysis of 1 6S rDNA sequence，the optimization of fermentation cond