裂殖酵母ing家族蛋白png1p在dna损伤应答过程中的功能研究-遗传学专业论文.docxVIP

优秀毕业论文 精品参考文献资料 复旦大学博士学位论文摘要 复旦大学博士学位论文 摘要 ING家族蛋白(盥ibitor of Growth)作为一类肿瘤生长抑制因子，在几乎所有 的真核细胞中都含有保守的同源蛋白，并广泛参与细胞凋亡，衰老，细胞周期调 控，DNA损伤应答，细胞分化，肿瘤生长，激素信号传递，基因表达和染色质 重构等多种过程。对ING家族蛋白参与DNA损伤修复的过程已经进行了许多的研 究，但是由于ING家族蛋白参与DNA损伤修复的分子机制比较复杂，对于ING家 族蛋白在DNA损伤信号传导通路上发挥的具体功能至今还未能完全有效解析。 裂殖酵母细胞含有两个ING家族蛋白：Pnglp和Pn92p。至今为止，在裂 殖酵母细胞中还没有关于ING家族蛋白参与DNA损伤应答的报道。同源进化分 析表明：Pnglp和Pn92p虽然同属ING家族，但两者位于系统发生树的不同分 支上。进一步，我们通过同源重组的方法成功地敲除了两个基因的ORF，获得了 突变体Apngl和t,pn92。功能分析表明删GJ和m，G2在细胞生长和DNA损伤 应答过程中执行了不同功能。 细胞生长和流式细胞术分析表明PNGl基因不仅是细胞正常生长所必需的， 同时也是DNA损伤修复所必需的，PNGl的缺失使细胞阻滞在了S期。酵母双 杂交，Pull．down实验，Co-IP实验，荧光共定位实验表明Pnglp与组蛋白乙酰 转移酶Mstlp密切相关，但两者可能没有直接的相互作用。TSA拯救实验和 westernblot检测表明Pnglp参与了组蛋白H4的乙酰化修饰。即旧』基因的缺失 使DNA损伤条件下裂殖酵母H4 K5、K8、K12位的乙酰化水平下降，并且这种 乙酰化程度的下调直接抑制了DNA损伤修复相关基因(如RAD22,ASFl，即乃)， 染色质重构相关基因(如SNF5)，细胞周期相关基因(如CDC20,CDC22，ENGl， 彳GM)的表达。更进一步的研究发现，在PNGl缺失突变体中分别过量表达DNA 损伤修复核心基因RAD22可以拯救PNGl缺失带来的DNA损伤敏感的表型。 因此，PNGl很可能通过RAD22途径参与了DNA损伤应答过程。 关键词：Pnglp，DNA损伤，裂殖酵母，组蛋白H4乙酰化，Mstl，Rad22 复旦大学博士学位论文摘要 复旦大学博士学位论文 摘要 ING家族蛋白(盥ibitor of Growth)作为一类肿瘤生长抑制因子，在几乎所有 的真核细胞中都含有保守的同源蛋白，并广泛参与细胞凋亡，衰老，细胞周期调 控，DNA损伤应答，细胞分化，肿瘤生长，激素信号传递，基因表达和染色质 重构等多种过程。对ING家族蛋白参与DNA损伤修复的过程已经进行了许多的研 究，但是由于ING家族蛋白参与DNA损伤修复的分子机制比较复杂，对于ING家 族蛋白在DNA损伤信号传导通路上发挥的具体功能至今还未能完全有效解析。 裂殖酵母细胞含有两个ING家族蛋白：Pnglp和Pn92p。至今为止，在裂 殖酵母细胞中还没有关于ING家族蛋白参与DNA损伤应答的报道。同源进化分 析表明：Pnglp和Pn92p虽然同属ING家族，但两者位于系统发生树的不同分 支上。进一步，我们通过同源重组的方法成功地敲除了两个基因的ORF，获得了 突变体Apngl和t,pn92。功能分析表明删GJ和m，G2在细胞生长和DNA损伤 应答过程中执行了不同功能。 细胞生长和流式细胞术分析表明PNGl基因不仅是细胞正常生长所必需的， 同时也是DNA损伤修复所必需的，PNGl的缺失使细胞阻滞在了S期。酵母双 杂交，Pull．down实验，Co-IP实验，荧光共定位实验表明Pnglp与组蛋白乙酰 转移酶Mstlp密切相关，但两者可能没有直接的相互作用。TSA拯救实验和 westernblot检测表明Pnglp参与了组蛋白H4的乙酰化修饰。即旧』基因的缺失 使DNA损伤条件下裂殖酵母H4 K5、K8、K12位的乙酰化水平下降，并且这种 乙酰化程度的下调直接抑制了DNA损伤修复相关基因(如RAD22,ASFl，即乃)， 染色质重构相关基因(如SNF5)，细胞周期相关基因(如CDC20,CDC22，ENGl， 彳GM)的表达。更进一步的研究发现，在PNGl缺失突变体中分别过量表达DNA 损伤修复核心基因RAD22可以拯救PNGl缺失带来的DNA损伤敏感的表型。 因此，PNGl很可能通过RAD22途径参与了DNA损伤应答过程。 关键词：Pnglp，DNA损伤，裂殖酵母，组蛋白H4乙酰化，Mstl，Rad22 复旦大学博士学位论文Abstract 复旦大学博士学位论文 Abstract 1NG(INhibitor of Growth)tumor suppressor proteins are very impo