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(10)过氧化物酶显色反应：以DAB H2O2液显色7～10min(镜下控制显色程度)，PBS洗，5min×3； (11)碱性磷酸酶显色反应：以萘酚AS.MX及坚固蓝(fast blue)显色10～15min(镜下控制显色程度)，PBS洗、自来水洗； (12)缓冲甘油封片，光镜下观察 注：若为同种动物抗血清，可分别进行标记染色，其间应经多聚甲醛蒸气处理4h或用pH2.2的甘氨酸---盐酸溶液处理2h，以避免彼此的交叉反应。 P P P A A A κ λ 图2 双酶双底物(复合物法)双重酶标染色原理 兔PAP GAR IgG 兔抗K Ag 鼠APAAP GAM. IgG 鼠抗人 ★其它双重标记法 1.免疫荧光法与免疫酶法联合应用(先酶标 后荧光) 2.免疫荧光法与免疫金银法联合应用(先 免疫金银标记后荧光标记) * 免疫组织化学的 双重或多重标记 要 求： 1.掌握IHC多重标记染色的基本原理 和技术要求 2.了解常用方法类型及其优缺点 概 述 应用IHC的方法在同一张组织切片上同时或先后显示两种或两种以上的抗原成分，即谓双重或多重免疫标记。 显示的水平可以是光镜