第十一空章抗体酶.pptVIP

* 抗体和酶的根本不同 抗体是结合一个基态分子，并且抗原与抗体结合后会发生沉淀，一般条件下不会自动分离。 酶选择性的结合一个化学反应的过渡态，帮助反应顺利进行，在完成反应后的瞬间与生成物迅速分离。 * 1946年，Pauling用过渡态理论阐明了酶催化的实质，后经过Jencks等人的探索，他们发现，过渡态分子难以捕获，而过渡态类似物是能够模拟一个酶催化反应过渡态的结构的稳定物质，于是设想，只要寻找到与反应中决定性步骤的相应酶紧密结合的酶竞争性抑制剂，就等于发现了过渡态类似物；还有一种思路，就是这种类似物也能根据化学反应机制推测设计出来。然后，以过渡态类似物为半抗原，利用哺乳动物的免疫系统，诱导与其互补构象的抗体产生，这种抗体即具有催化活性；接着，Kohler和Milstein于1975年发明了具有历史意义的单克隆技术，使抗体酶的生产成为可能。 1984年Lerner进一步推测：以过渡态类似物作为半抗原，则其诱发出的抗体即与该类似物有着互补的构象，这种抗体与底物结合后，即可诱导底物进入过渡态构象，从而引起催化作用。根据这个猜想Lerner和P．C．Schultz分别领导各自的研究小组独立地证明了：针对羧酸酯水解的过渡态类似物产生的抗体，能催化相应的羧酸酯和碳酸酯的水解反应。1986年美国《Science》杂志同时发表了他们的发现，并将这类具有催化能力的免疫球蛋白称为抗体酶（abzyme）或催化抗体（catalyticantibody）。 * 1986年Schultz和 Lerner以对硝基笨酚磷酸胆碱酯（PNPPC）作为相应的羧酸二酯的过渡态类似物。通过的单克隆抗体的筛选，成功的获得了一株MOPC167单抗，可使水解反应提高1.2×104倍,以后又分离出另一株单抗酶T15。从此开创了单抗酶研究的新时代。 概念：抗体酶 或催化抗体（Catalytic antibody)是，在其可变区赋予了酶的属性。它是利用现代生物学与化学的理论与技术交叉研究的成果，是抗体的高度选择性和酶的高效催化能力巧妙结合的产物。 * 半抗原，只有抗原性而无免疫原性的物质。其可与抗体或致敏淋巴细胞特异性结合，但不能单独诱发免疫应答。或者是具有抗原性，但只有与载体结合才能引起机体产生免疫反应的抗原物质。 抗体和酶的根本不同在于前者是结合一个基态分子，并且抗原与抗体结合后会发生沉，一般条件下不会自动分离，而抗体选择性的结合一个化学反应的过渡态，帮助反应顺利行，在完成反应后的瞬间与生成物迅速分离 1、过渡态理论与抗体酶 2、抗体酶催化的三种重要反应机制 水解作用机制 基团转移 连续反应机制 3、抗体酶催化反应的介质效应 酯解反应中介质效应 ： 抗体酶在有机溶剂中具稳定性。 脱羧反应中介质效应 ；有机溶剂引起脱羧反应速率增加。 酰基转移反应中介质效应 ：在疏水溶剂中，活性较高。 * 实现抗体向酶转变的关键是抗原能诱导已具有酶活性的抗体。要使抗体具备催化活性即要使其具备酶的特征，为使抗体具有酶的结构，就必须在抗原的结构上进行改造。而抗体设计的原则就是酶的催化机制，故免疫学原理以及过渡态理论是抗体酶设计的主要依据。 酶－底物、抗体－抗原的结合模式是相近的，即均具有高亲和力和空间结构及电荷分布上的互补特性。但上述两种结合对象不同，由于抗体仅仅与低能结构结合，所以通常情况下抗体不具备催化活性。 那么，若利用某一反应过渡态的模拟物作为抗原，则可得到催化该反应的抗体。且这一过渡态类似物具有稳定结构，这样就可以用化学手段加以合成。制备抗体酶的关键在于设计半抗原，只有这种特定的抗原才能诱导具有酶样结构与功能的抗体。 制备抗体酶的关键在于设计半抗原，只有这种特定的抗原才能诱导具有酶样结构与功能的抗体。 * 3. 细胞融合法： 用设计好的半抗原，通过间隔链与载体蛋白（如牛血清白蛋白）偶联制成抗原。然后对此抗原进行免疫，使宿主有机体针对抗原产生抗体，产生抗体的脾脏细胞与骨髓细胞相融合。融合得到的杂交细胞既能产生抗体又能在体外培养。将杂交体克隆化，即能产生单一均匀的抗体。 * 用酶作为抗原免疫动物得到抗酶的抗体，再将此抗 体免疫动物并进行单克隆化，获得单克隆的抗抗体。 对抗抗体进行筛选，应获得具有原来酶活性的抗体酶。 * 抗体酶催化的三种重要反应机制 水解作用机制 基团转移 连续反应机制 * 。目前正在发展一种称为抗体介导前药治疗（ADEPT）技术，即将能水解前药释放出肿瘤细胞毒剂的酶和肿瘤专一性抗体相偶联，这样酶就会通过和肿瘤结合的抗体而存在于细胞的表面。静脉给药后，当药物扩散至肿瘤细胞的表面或附近，抗体酶就会将前药迅速水解释放出抗肿瘤药物，从而提高