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* * 答辩人： 指导教师： 2014.5.31 木质素代谢途径转录因子的研究 主要内容 研究背景 研究目的 研究内容及结果分析 小结与讨论 展望 致谢 研究背景 化石能源的储量有限，且其大量消耗会带来严重的环境问题，生物能源以其原料多样、可再生性和对环境友好的特点被世界各国重视和开发利用。 新型的能源作物。 的一大障碍。 方法之一。 研究背景 木质素代谢及调控的相关研究 到目前，已经分离鉴定出一系列参与到木质素代谢调控中的转录因子，例如拟南芥，烟草，玉米，水稻，杨树等中的NST、MYB、MYC、SND、VND、LIM等，）。 木质素的合成涉及复杂的网络(Naoumkina, Zhao et al. 2010) 。通过转录因子调控木质素特异合成途径中酶的活性，进而调控木质素的合成，可以更好的实现对木质素的控制。这是因为未直接改变关键酶，对其涉及的其他代谢通路的影响可能会相应减少。 转录因子1 研究背景 LIM转录因子 结构特征： LIM转录因子在结构上都含有一个及以上LIM结构域（LIM domain），为高度保守的锌指结构域，保守氨基酸序列为CX2 CX17~ 19 HX2CX2CX16~ 20 CX2 C/ H/ D。该结构域存在于细胞核和细胞质中，也可以在两者之间穿梭往来。 功能： 在脊椎动物中属于CRPs亚家族，主要参与： 细胞分化；细胞骨架的构建和转录调控； 在植物中主要分为两大类： ① 在花粉中特异性表达的 PLIM1 和 PLIM2； ②在植物体内广泛分布的 WLIM1 和 WLIM2。 研究背景 前期工作 查找到与同源性最高，克隆到cDNA全长。 在多个bmr突变体中上调表达。 构建过表达载体并浸染拟南芥 （硕士论文，2012） 研究目的 研究内容及结果分析 聚类分析 研究内容及结果分析 亚细胞定位 pBI221GFP载体示意图 载体构建过程 研究内容及结果分析 亚细胞定位 洋葱表皮瞬时表达分析 研究内容及结果分析 亚细胞定位 拟南芥原生质体瞬时表达分析 研究内容及结果分析 体外转录激活实验 pGBKT7载体图 酵母表达载体构建 研究内容及结果分析 体外转录激活实验 SD-Trp： SD-Trp-His-Ade： 酵母在单缺、 三缺培养基上生长情况 研究内容及结果分析 过表达拟南芥纯系的筛选 研究内容及结果分析 过表达拟南芥中表达量分析 研究内容及结果分析 过表达拟南芥木质素含量测定及Wiesner染色 ** * Lignin content (OD\gDW) 拟南芥过表达株系同野生型木质素含量测定 木质素染色分析：(A)放大倍数100 (B) 放大倍数200 研究内容及结果分析 过表达拟南芥株系中木质素代谢途径Marker基因表达量分析 研究内容及结果分析 过表达拟南芥株系中木质素代谢途径转录因子表