2013年高中生物112无菌操作和接种技术及微生物的分离、培养与数项量测定同步课件苏教版选修1.pptVIP

3.培养 将划线或涂布接种的平板倒置于37 ℃培养箱 中，培养16～24 h，即可长出单菌落。 【问题与探究】 1.在涂布平板操作中，如何避免杂菌污染？ 【提示】　(1)酒精灯与培养皿的距离要适中。 (2)接种环、玻璃刮铲不能接触任何物体。 (3)接种环要用酒精灯灼烧。 (4)将沾有少量酒精的玻璃刮铲在火焰上引燃。 2.未接种的培养基表面有菌落生长，说明了什么？ 【提示】　如果未接种的培养基在恒温箱中保温1～2 d后有菌落生长，说明培养基灭菌失败，需要重新制备。 3.在接种大肠杆菌的培养基上，你是否观察到了独立菌落？ 【提示】　如果培养基上生长的菌落的颜色、形状、大小基本一致，并符合大肠杆菌菌落特点，则说明接种操作符合要求；如果培养基上出现其他菌落，有其他杂菌混杂，可再一次进行分离、纯化，直到获得纯培养。 【例题】　有些微生物能合成纤维素酶，通过对这些微生物的研究和应用，使人们能够利用秸秆等废弃物生产酒精，用纤维素酶处理服装面料等。研究人员用化合物A、硝酸盐、磷酸盐以及微量元素配制的培养基，成功地筛选到能产生纤维素酶的微生物。分析回答问题： (1)培养基中加入的化合物A是________，为微生物的生长提供________，这种培养基从功能上进行分类，应属于________培养基。 (2)若用平板划线法获得纯净的菌株，请回答： ①在接种时，为什么在操作的第一步以及每次划线之前都要灼烧接种环？ __________________________________。 ②在划线操作结束时，仍然需要灼烧接种环吗？为什么？ ___________________________________。 ③除此之外，还可用____法来获得纯净的菌株。 【解析】　若筛选到能利用纤维素(可产生纤维素酶)的微生物，培养基中加入的化合物A，应为纤维素。制备只以纤维素作碳源的选择培养基，能在该培养基中生长的微生物应为可产生纤维素酶的微生物，此即目标微生物。 【答案】　(1)纤维素 　碳源 　选择 (2)①第一步灼烧接种环是防止接种环上有其他微生物而污染培养基；每次划线前灼烧接种环是为了杀死上次接种时留下的菌种，使下一次划线时接种环上的菌种直接来自上次划线的末端，以便通过多次划线后，得到单个的菌落 ②划线结束后仍要灼烧接种环，以免菌种对环境造成污染 ③稀释涂抹平板 变式训练 2.有关稀释涂抹平板法的叙述，错误的是 (　　) A．首先将菌液进行一系列的梯度稀释 B．然后将不同稀释度的菌液分别涂抹到琼脂固体培养基的表面 C．适宜条件下培养 D．结果都可在培养基表面形成单个的菌落 解析：选D。稀释涂抹平板法是将菌液进行一系列的梯度稀释。然后将不同稀释度的菌液分别涂抹到琼脂固体培养基的表面，在适宜条件下培养。只有在稀释度足够高的菌液里，聚集在一起的微生物将被分散成单个细胞，从而能在培养基表面形成单个的菌落。 菌落数目的统计方法 1.显微镜直接计数法 (1)原理：此法利用特定细菌计数板或血细胞计数板，在显微镜下计算一定容积的样品中微生物的数量。 (2)方法：用计数板计数。计数板是特制的载玻 片，其上有特定的面积为1 mm2，高为0.1 mm的计数室，一个计数室又被分成25个(或16个)中 格，每个中格再被划分成16个(或25个)小格，每个计数室都由400个小格组成。 (3)操作：将稀释的样品滴在计数板上，盖上盖玻片，然后在显微镜下计数4～5个中格中的细菌数，并求出每个小格所含细菌的平均数，再按计算公式求出每毫升样品中所含的细菌数。 (4)计算公式 每毫升原液所含细菌数＝每小格平均细菌数×400×10000×稀释倍数。 (5)缺点：不能区分死菌与活菌。 2.间接计数法(活菌计数法) (1)原理：当样品的稀释度足够高时，培养基表面生长的一个菌落，来源于样品稀释液中的一个活菌，通过统计平板上的菌落数，就能推测出样品中大约含有多少活菌。 (2)操作 ①设置重复组，增强实验的说服力与准确性。将待测样品经一系列10倍稀释，然后选择三个稀释度的菌液，分别取0.1 mL接种到已制备好的平板上，然后用无菌涂布器将菌液涂布在整个平板表面，放在适宜的温度下培养计数菌落 数。为使结果接近真实值，可将同一稀释度菌液加到三个或三个以上的平板上，经涂布、培 养，计算出菌落平均数。 ②为了保证结果准确，一般选择菌落数在30～300的平板进行计数，若设置的重复组中结果相差太远，意味着操作有误，需重新实验。 3.滤膜法 (1)实例：测定饮用水中大肠杆菌的数目。 (2)过程：将已知体积的水过滤后，将滤膜放于伊红美蓝培养基上培养，在该培养基上，大肠杆菌菌落呈现绿色，并带有金属光泽可根据培养基上绿色的菌落数目，计算出水样中大肠杆菌的数量。 特别提醒 统计菌落数目的注意事项： ①一般选择菌落数在30～