离子色谱在药品检验中的应用与展望..pptVIP

离子色谱在药品检验中的应用与展望 山东省药品检验所 化学药品科 凌霄 2010年10月25日 20世纪40年代 20世纪60年代末 Novel ion exchange chromatographic method using conductimetric detection ------Hamish Small, et. al. Anal. Chem., 1975, 47 (11), 1801- 内 容 分离阴离子 影响离子保留的因素 离子色谱法中用分配系数（指在固定相和流动相中的浓度比）来描述离子的色谱保留行为，不同离子分配系数的差异是色谱分离的基础。 影响因素有流动相流速、分离柱长度、柱温、固定相性质、流动相的种类与浓度、流动相的pH等。 离子排斥色谱法的分离假说 Donnan排斥作用 吸 附 空 间 排 阻 离子对的分离机理 1.生成离子对－待测离子与离子对试剂生成中性“离子对”分布于 固定相与流动相之间，其分离类似传统的反相分离 2.动态离子交换－离子对试剂的疏水部分吸附于固定相形成动 态的离子交换表面，其分离机理类似于离子交换。 3.离子间相互作用－除包括以上两种分离机理和固定相表面双 电层结构的分离机理。 离子色谱固定相—分离的核心抓住基础注重积累关注发展 离子色谱流动相选择的条件 有一定的洗脱能力； 化学、物理性质稳定； 与被测离子有一定的性质差异； 对检测器响应值尽可能小 离子色谱使用的水与试剂 纯度尽可能高 抑制型阴离子色谱的典型流动相 阳离子交换流动相的选择 流动相有足够的电离，以提供阳离子的脱离； 多价阳离子有更大的洗脱能力； 洗脱离子半径越大，洗脱能力越强； 与被测离子有足够大的电导差异； 对抑制电导法，抑制后流动相背景电导足够小 流动相的背景较小较理想； 酸或对应的弱碱 对于有机胺类，加入有机改进剂，会减少保留时间并且改善峰形 阳离子交换所用的流动相 盐酸 硝酸 硫酸 甲磺酸 吡啶－2,6－二羧酸 离子排斥色谱常用流动相 主要作用:改变溶液的pH值,控制有机酸的离解 最简单的是去离子水， 对有机酸的分析，常用矿物酸，如 HCl，H2SO4，HNO3等。 Ag+型阳离子交换剂作抑制器填料: HCl 若用直接UV检测: H2SO4 混合流动相 流动相中添加有机溶剂（疏水性离子的吸附、分配） 强流动相＋弱流动相（淋洗强度的准确调节） 流动相中有目的地添加特殊试剂（如：酒石酸＋冠醚，用于钾钠分离） 检测器 样品处理 过滤 样品中除去颗粒物 用0.45μm 或0.22μm 滤膜 用高纯水冲洗滤膜 ，以减少沾污 稀释 待测物浓度较高时，应预先稀释. 降低干扰物的浓度. 去除干扰物 预处理柱，超滤 固相萃取?液相萃取?离心?盐析 在线柱处理 在药检领域的应用 《中国药典》2010年版新增品种 糖类分析 氨基酸分析 新增品种 帕米磷酸二钠 氯膦酸二钠 帕米磷酸二钠Pamidronate Disodium(Pamidronate Disodium Pentahydrate) 帕米磷酸二钠 氯膦酸二钠 Clodronate Disodium(Clodronate Disodium Tetrahydrate) 氯膦酸二钠 糖类分析的原理 在强碱溶液中呈离子化状态 糖具有电化学活性 Rocklin R D, Pohl C A. J Liquid Chromatoger 1987, 388:46 六种单糖标准溶液的离子色谱图 氨基酸分析 1样品不需衍生化处理，可直接分析； 2灵敏度高，最小检测浓度可达ppb级（μg/L）。 常见的氨基酸如下： 丙胺酸、精氨酸、天冬酰胺酸、天冬氨酸、半胱氨酸、谷氨酰胺、谷氨酸、组氨酸、甘氨酸、异亮氨酸、亮氨基酸、赖氨酸、蛋氨酸、苯基丙氨酸、脯氨酸、丝氨酸、苏氨酸、色氨酸、酪氨酸、颉氨酸、羟基赖氨酸、羟基脯氨酸、正亮氨酸、磺基丙氨酸、胱氨酸、甘氨酰基。 氨基酸分析的原理 氨基酸具有两性离子结构，在酸性介质中，以氨基阳离子状态存在；在碱性介质中，以羧基阴离子状态存在，这也是氨基酸分离分析方法的基础。 在pH 12-13，氨基酸与阴离子交换树脂之间的静电吸引的大小次序是酸性氨基酸中性氨基酸碱性氨基酸,因此氨基酸的洗脱顺序大体是碱性氨基酸,中性氨基酸和酸性氨基酸。 An Integrated