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色谱分析法概论 本章主要内容 色谱法的分类与发展 色谱过程与基本原理 基本类型色谱方法及其分离机制 色谱法基本理论 色谱法分类 1.按流动相与固定相的分子聚集状态分类 气相色谱、液相色谱、超临界流体色谱。 2.按操作形式分类 柱色谱、平面色谱、毛细管电泳 3.按色谱的分离机制分类 分配色谱、吸附色谱、离子交换色谱、空间 排阻色谱 色谱的流出曲线和有关概念 分配系数与色谱分析 1．相平衡参数 分配系数(K) 分配平衡后，组分在固定相(s)与流动相(m) 中浓度之比称为分配系数 K = Cs / Cm 与组分、流动相、固定相的性质和温度有关 Cs------组分在固定相(s) 中浓度 Cm-----组分在流动相(m)中浓度 2. 容量因子k k表示组分在固定相和流动相中的质量之比 k = ms / mm = CsVs / CmVm = KVs / Vm Vm为色谱柱中流动相的体积，Vm=V0，Vs为柱中固定相的体积 基本类型色谱方法及其分离机制 分配色谱：利用被分离组分在固定相或流动相中的溶解度差异实现分离。 狭义分配系数 K=Cs/Cm=(Xs/Vs)/(Xm/Vm) 洗脱顺序：在固定相中溶解度大的后洗脱下来。 吸附色谱：利用被分离组分对固定相表面吸附中心吸附能力的差异实现分离。 试样中组分与流动相分子争夺吸附剂表面吸附中心的过程。 Xm+nYa===Xa+nYm Ka=[Xa][Ym]n/[Xm][Ya]n 离子交换色谱：被分离组分离子交换能力的差异而实现分离 KA/B=KA/KB 空间排阻色谱 ：根据被分离组分的线团尺寸而进行分离。 色谱法基本理论 ．塔板理论 （一）基本假设 1．组分在一个塔板高度内两相间达到平衡 2．间歇式 3．忽略纵向扩散 4．分配系数在各塔板上是常数 （二）正态分布 正态分布方程 速率理论 塔板理论在解释流出曲线的形状、组分的分离及评价柱效是成功的。但是忽略了组分在塔板中的分配平衡及纵向扩散。 * * 1 色谱峰 对称因子 fs= W0.05h / 2A = (A+B) / 2A 对称因子（fs） fs=W0.05h/2A W0.05h为0.05倍峰高处的峰宽， fs=0.95~1.05为对称峰；fs＜0.95为前沿峰；fs＞1.05为拖尾峰。 2 基线 在操作条件下，没有组分流出时的流出曲线为基线 3保留值 1)保留时间（tR） 从进样开始到某个组分的色谱峰顶点的时间 2)死时间（to） 分配系数为0的组分的保留时间 3)调整保留时间（t’R） t’R= tR-to 定性参数 4)保留体积（VR） VR= tR×FC FC----载气流速 5)死体积（Vo）Vo= to×FC Vo越大，色谱峰扩张，柱效降低 6)调整保留体积（V’R） V’R= VR-Vo或V’R= tR’×FC 7) 相对保留值 两组分的调整保留值之比 r2,1=t`R2/ t`R1=V`R2/ V`R1 8) Kovats保留指数 4 色谱区域宽度（柱效参数） ① 标准差σ（表示组分被带出色谱柱的分散程度）：0.607倍峰高处。 峰高处宽度的一半。σ小，峰窄，分散程度低，柱效高。 ②?半峰宽（W1/2）：半峰高处峰的宽度 W1/2=2.355σ ③?峰宽（W）：衡量柱效的参数 W=1.699 W1/2 或 W= 4σ 5 分离度 （一）定义：相邻二色谱峰峰尖距离对峰宽均值的倍数为分离度 R＜1, 峰重叠，未分开 R = 1, 认为基本分开，4σ分离 R = 1.5, 两峰完全分离，6σ分离 在色谱柱中, 设R’表示溶质分子在流动相中的几率, 因为溶质 分子只有出现在流动相才能随着流动相移动 R’ = u / uo u------组分的移动速度 uo------流动相的移动速度 设柱长为L, u = L / tR uo = L / to 流动相通过整个色谱柱的时间to, 溶质分子通过整个色谱柱的 时间tR , tR = L / u = L / R’uo = to / R’