融合蛋白基因工程应用及研究.PDFVIP

融合蛋白基因工程应用及研究 张 毅 屈贤铭 杨胜利 (中科院上海生物工程研究中心，上海200233) 摘要 通过重组DNA技术将不同的基因或基因片段融合在一起，经表达后可以得到由不同的功 能蛋白拼合在一起而形成的新型多结构域的人工蛋白，这是一种极具潜在应用价值与理论意义的 方法。目前这种方法已被广泛应用于许多领域的研究中，并已显示出较高的价值，本文尝试对融 合蛋白研究的几个领域的发展情况进行综述。 关键词融合蛋白基因工程 在自然界中，许多多结构域(或多功能域)的蛋 主细胞的蛋白酶所降解，当外源基因与宿主本身的 白是由数个多肽链片段拼接在一起而形成的1，有一 某种蛋白(如p一半乳糖苷酶)的部分编码序列构成 种观点认为，由相对较小的结构域(domain)拼装成融合基因，以融合蛋白的形式表达时，往往会减低宿 较大的多功能蛋白是自然进化中的一个重要因素2。 主细胞对产物的降解6。除此之外，利用融合蛋白的 Robert B．Russel3在分析了多例由插入形成的多功形式表达外源基因产物还有以下的一些特殊的优 能域的蛋白的结构后得出这样的推论：结构域的插 点。 入可能是自然界形成已有的多结构域组合的一种策 1．1分泌表达 略。 将外源目的基因连接在信号肽的编码序列后 总之，蛋白的结构常常可以容许包括整个结构 面，这样所表达的目的基因产物即可被信号肽引导 域的插入与融合，在自然界中，通过结构域的插入与 而分泌到大肠杆菌细胞膜外的周质中，周质内的氧 融合从而形成大的多功能蛋白是一种较为普遍存在 化环境有利于外源蛋白二硫键的形成，有利于产物 的现象。 蛋白的正确折叠，从而使得外源蛋白有可能以有生 重组DNA技术的应用使得不同基因或基因片 物活性的可溶性的形式表达。另外，由于周质中仅 段的融合可以比较方便地进行，融合的基因经表达 含约4％的蛋白，因此周质表达也为随后目的表达 后即可得到由不同的功能蛋白拼合在一起而形成的 新型多结构域的人工蛋白，这是一种极具潜在应用 价值与理论意义的方法。目前这种方法已被广泛应 一1)9等均以此种方式得到表达。 用于许多领域的研究中，并已显示出较高的价值，本 1．2通过融合表达为蛋白纯化提供便利 文尝试对融合蛋白研究的几个领域的发展情况进行 将外源目的基因与一段被称为“亲和手柄” 综述。 (affinity 柄”可以与亲和层析柱上的配基特异性地结合，这样 l融合蛋白在基因表达方面的应用 所表达的融合蛋白可以用亲和层析的方法快速而简 基因融合技术最早即是被用来在细菌(主要是 便地纯化出来。所得到的融合蛋白经化学方法或酶 大肠杆菌)中表达外源蛋白，如Somatostatin4、in—法切割开来之后，混合产物再上同一亲和柱，充作 sulin5等，对于外源基因(尤其是真核基因)，利用融“亲和手柄”的一段多肽或蛋白以及尚未被切开的融 合表达的方法在大肠杆菌中表达有很多优点，一是 合蛋白被吸附于柱上，而重组目的产物则处于流动 由于外源基因一般是被连接到可供融合的蛋白的C 相中。这样，经过比较简单的几步即得到较高纯度 端编码序列之据，因此不需另外设计SD序列，同 的重组目的蛋白。 时，N端融合基因的存在，使得外源基因的表达相对 1．3通过融合表达的方式促使产物以包涵体的形 比较容易。其二是外源基因的表达产物常常会被宿 式表达 13 万方数据