常规分子生物母学操作要点.pptVIP

* 对引物进行电泳一定要使用变性PAGE电泳。由于引物是单链DNA，容易形成复杂的立体结构，因此进行Agarose电泳时，容易出现多条泳带，更无法用Agarose电泳进行定量了。 能否根据引物电泳后EB染色后条带的亮度对合成的引物进行定量?不能。因为EB是通过嵌入到核酸的双螺旋间而使其着色的。合成的DNA分子为单链，只有通过自身回折形成局部发夹环结构或链间形成部分双螺旋结构，才能被EB染色。由于不同引物的序列不同，形成双螺旋的能力不同，因此染色能力不尽相同，也就不能根据EB染色带的亮度来对合成的DNA进行定量。  如果我想让这个基因表达得更好呢，怎么办啊？我们可以加上一些增强子，翻译增强序列，内质网定位，以及一些信号肽， 所有这些我们在做实验之前都应该想清楚，我要让我的基因以一种什么样的方式表达，我的表达目的是干什么，我要达到这个表达目的我需要哪些元件，这些元件之间应该是一个怎么样的排列顺序，要达到这个目的，需要有很好的分子遗传学的基础，就是我要知道呢，哪个元件会影响或控制我这个基因的表达，只有这些东西都清楚了，你的实验设计才能清楚。 * 转录增强子和翻译增强序列 * * * 接下来看一下GsCBRLK基因的保守结构域预测结果，它包含激酶催化结构域的11个亚基，同时含有一个钙调素的结合位点。 * 这个结合位点在氨基酸序列上保守性比较差。但是它在二级结构上会形成一个两性的a