《基于表面增强拉曼技术的DNA循环放大生物传感方法的研究》-毕业论文（设计）.doc

PAGE 分类号 ： 学校代码 ： 10426 密级 ： 学号 ： 2011050205 硕 士 学 位 论 文 MASTER DEGREE THESIS 基于表面增强拉曼技术的DNA循环放大生物传感方法的研究 作 者 ： 郭园园 指导教师 ： 张书圣 学科专业 ： 分 析 化 学 专业代码 ： 070302 研究方向 ： 生物化学分析 2014 年 4 月 10 日 PAGE \* MERGEFORMAT V PAGE \* MERGEFORMAT V 基于表面增强拉曼技术的DNA循环放大生物传感方法的研究 摘 要 本文主要做了以下几个方面的工作：一是基于表面增强拉曼光谱（surface enhanced Raman scattering spectrum, SERS）检测技术构建了一种新型的DNA循环放大方法，利用DNA酶和目标分子结合后独特的共反应催化剪切活性，实现了高灵敏度检测小分子物质L-组氨酸的方法。二是将纳米金粒子上分别修饰Rox分子和Cy3分子，制备了具有SERS活性的两种纳米金生物条码，基于表面增强拉曼散射分析方法，结合靶DNA引发的链替代循环反应，实现了两种目标DNA的同时检测。在此基础上，引入双功能适体探针，实现了ATP和L-组氨酸的同时检测。具体介绍如下： 1. 利用DNA酶替代了传统检测方法中的目标分子识别适体，基于DNA酶与目标分子结合而引发的共反应催化剪切活性释放引发链，进而激发链替代循环反应，结合发卡探针引发的循环放大方法，实现了小分子物质L-组氨酸的高灵敏度检测，检测限达0.74 nM (3σ)。利用引发链的再循环利用，固定在磁珠上的发卡探针被不断的打开，进而大量的生物条码被固定到了磁珠上，实现了高效的源头信号放大，并通过磁性分离和洗涤，除去过量的纳米金生物条码，降低了检测体系的背景值，从而实现了L-组氨酸的高灵敏度检测，可用于实际样品细胞匀浆中的L-组氨酸的测定。该方法设计较为简单，操作快捷方便，更有广泛的适用性和良好的选择性。 2. 利用表面增强拉曼散射技术高分辨率的特性，基于DNA链之间的碱基互补原理，创建了一种新型的电化学检测方法，实现了两种目标DNA的同时检测。以纳米金为增强底物，制备了分别由Rox分子、Cy3分子修饰的两种不同的生物条码探针。在目标DNA存在下，发生引物链增长-替代反应，实现了源头信号放大，使信号显著增强，检测灵敏度显著提高。 3. 构建了一种新型的DNA双功能适体链，结合DNA循环放大反应，提出了一种利用表面增强拉曼技术同时检测ATP与L-组氨酸的方法。在金纳米粒子上分别修饰上Rox分子与Cy3分子，得到两种不同的生物条码。利用DNA双功能适体链与两种目标分析物的特异性结合，释放出两条引物链，激发对应发卡探针的循环放大反应，大量的生物条码被固定到磁珠上。最终通过检测固定到磁珠上的生物条码，实现了两种目标分析物质ATP与L-组氨酸的高灵敏度检测。 关键词：适体DNA 表面增强拉曼光谱 纳米金生物条码 循环放大 PAGE \* MERGEFORMAT PAGE \* MERGEFORMAT II PAGE \* MERGEFORMAT I PAGE \* MERGEFORMAT I BIOSENSING METHOD RESEARCH WITH DNA-RELATED CYCLES AMPLIFICATION USING SERS DETECTION TECHNOLOGY ABSTRACT In this study, a series of SERS signal amplification biosensing methods were developed with high sensitivity, easy operation and good reproducibility. First, a novel SERS method was designed to detect L-histidine based on DNA amplification tec