动物细胞培饱养和核移植技术.pptVIP

动物细胞工程 学习目标 简述动物细胞培养的过程、条件及应用。 简述通过动物体细胞核移植技术克隆动物的过程和应用前景。 注意关键词: 细胞贴壁 接触抑制 原代培养 传代培养 有关概念 细胞贴壁：培养贴附性细胞时,细胞要能贴附于底物上才能生长繁殖。 注：也有一些细胞（如淋巴细胞）能够持续在悬浮状态下生长 。 接触抑制：贴壁细胞分裂生长到表面相互接触时，细胞就会停止分裂增殖 原代培养：从机体取出后立即培养的细胞为原代细胞（分装前的细胞培养）；也有人把第一代细胞的培养与10代以内的细胞培养统称为原代培养。 传代培养：将原代细胞从培养瓶中取出，配制成细胞悬浮液，分装到两个或两个以上的培养瓶中继续培养，称为传代培养。 * 动物细胞培养 动物细胞融合 单克隆抗体技术 核移植 动物细胞工程常用技术 是其他动物细胞工程技术的基础。 自体皮肤移植 对大面积烧伤的病人来说：自体健康皮肤有限，他人皮肤来源不足，且会产生排斥反应。 如何才能获得大量的自体健康皮肤？ 1.动物细胞培养 如何进行细胞培养? 从动物机体中取出相关组织，将它们分散成单个细胞，然后放在适宜的培养基中，让这些细胞生长和增殖。 1.1概念 原理：细胞增殖 动物组织细胞间隙中含有弹性纤维和胶原纤维等蛋白质成分，将细胞网络起来形成具有一定弹性和韧性的组织和器官。 传代培养的三个阶段 1、从首次传代到传至10代：容易传代，传代细胞正常的二倍体核型不会改变。 核型（染色体组型）：一个细胞内所有染色体的大小、形状和数量特性的汇总。 2、细胞传至10-50代左右时：细胞增殖缓慢，以至于完全停止，此时部分细胞的细胞核型可能会发生变化。 3、10-50代之后：如果继续传代培养，少部分细胞会克服细胞寿命的自然极限，获得不死性，这些细胞已经发生了突变，正在朝着等同于癌细胞的方向发展。 当今被广泛接受的两个概念 细胞系：原代培养细胞经首次传代成功以后即称为细胞系。其中能够连续传代的细胞叫做连续细胞系或无限细胞系，不能连续培养的称为有限细胞系。 细胞株：从原代培养细胞或细胞系中分离出单细胞，由单细胞增殖形成的细胞群。 资料：为什么体外培养的动物细胞会贴壁？ 贴附是有机体细胞在体内生存和生长发育的基本方式，包括细胞与细胞之间的相互接触和细胞与细胞外基质之间的相互接触两种方式。正是基于细胞的这种贴附生长的特征，使得不同细胞之间结合而形成组织，也使细胞与周围环境之间保持联系。因而有机体的绝大多数细胞必须贴附在某一固相支持物上才能生长增殖。体外培养时多数细胞仍然保持了这种特性，即必须贴附在培养瓶壁等支持物上才能生长增殖。 思考题： 1、为什么选用动物胚胎或幼龄个体的器官或组织做动物细胞培养材料？ 2、为什么培养前要将组织细胞分散成单个细胞？ 因为这些组织或器官，分裂能力旺盛，易于培养。 成块组织使细胞靠在一起限制了细胞的生长和增殖，且细胞不能与培养液充分接触，不利于培养。 3、胰蛋白酶的作用是什么呢？由此可说明细胞间的物质是什么成份？ 催化蛋白质水解。细胞间的物质主要是蛋白质(胶原蛋白、弹性蛋白等)。 4、细胞膜的主要成份是什么？ 蛋白质和磷脂 5、胰蛋白酶能将细胞消化掉吗？ 能 6、既然胰蛋白酶能将细胞消化掉，那将动物组织分散成单个细胞要注意什么问题呢？ 7、能够用胃蛋白酶代替胰蛋白酶吗？为什么？ 注意时间的控制 不能，因为两者的最适PH不同，而正常组织细胞的生存环境与胰蛋白酶的最适PH较接近 学案p1:【思考探究】 教材p46【讨论】 多细胞动物和人体的细胞都生活在内环境中，根据你所学的内环境的知识，思考并讨论以下问题： 1.体外培养细胞时需要提供哪些物质？ 充足的营养供给、适宜的温度、适宜的pH和气体环境。 2.体外培养的细胞需要什么样的环境条件？ 无菌、无毒的环境。 1.2 动物细胞培养的条件 1.无菌无毒的环境 对培养液和所有培养用具无菌处理； 在培养液中添加一定量的抗生素； 定期更换培养液。 2.营养：糖、氨基酸、促生长因子、无机盐、微量元素等 3.温度和pH：36.5+0.5度；PH为7.2-7.4 4.气体环境： 培养皿或松盖培养瓶，置于O2和CO2（95%空气和5% CO2 ） 学案p2相关问题 使用合成培养基时，加入动物血清、血浆 （1）生产生物制品：病毒疫苗、干扰素、单克隆抗体等。 （2）作为基因工程中的受体细胞。 （3）用于检测有毒物质 （4）用于生理、病理、药理等方面的研究，为治疗和预防癌症和其他疾病提供理论依据 1.3