右旋糖苷衍生物纳米粒对人乳腺癌细胞的转染作用研究.PDFVIP

Bulletin2008 ·1019· 中国药理学通报ChinesePharmacologicalAug；24(8)：1019—22 右旋糖苷衍生物纳米粒对人乳腺癌细胞的转染作用研究 李明春，梁东升，李友伟，刘莉 (解放军第四零一医院药剂科，山东青岛266071) 中国图书分类号：R318．08；R329．2；R394；R394-3；R349．2； 袋(截流分子量l万～1．4万，美国)；透析袋(截流 R 973．5 737．9；R 文献标识码：A文章编号：1001—1978(2008)08—1019—04 胞株(中国科学院上海细胞生物学研究所)；胎牛血 摘要：目的 以右旋糖苷为起始反应物制备对人乳腺癌细胞 清、RPMI1640细胞培养液(天津瑞爱金生物科技有 具有高转染活性的右旋糖苷衍生物纳米粒非病毒基因载体。 限公司)；pEGFP—C1质粒(含绿色荧光蛋白报告基 方法先将右旋糖苷40与高碘酸钠以不同的配比进行反 应，生成醛基含量不同的氧化右旋糖苷；氧化右旋糖苷与精 胺以不同的配比反应，共生成9种右旋糖苷衍生物纳米粒； 剂(华美生物工程公司)；其它试剂均为国产AR 级。 以绿色荧光蛋白基因为报告基因、mda．mb-435人乳腺癌细 胞为转染细胞，考察9种合成物的基因转染活性，从中选出 1．2仪器定时恒温磁力搅拌器(85．2型，上海浦 转染活性最高的生成物。结果高碘酸钠与右旋糖苷40按 东物理光学仪器厂)；pH计(pHs一3c型，上海大普仪 摩尔比为0．8：1反应生成氧化右旋糖苷；该氧化右旋糖苷 器有限公司)；电子分析天平(FAl604型，上海衡平 再与精胺按1：l的摩尔比继续反应，生成的终产物的转染效 仪器仪表厂)；荧光显微镜(XSP—IOC型，上海长方 率最高。结论制备出了对mda．mb-435人乳腺癌细胞具有 光学仪器有限公司)；电泳仪(DYY-2C型，北京六一 高转染活性的右旋糖苷衍生物纳米粒非病毒基因载体。 lab)；倒置生物显微镜(XDS一1A型，上海精密仪器仪 关键词：右旋糖苷；精胺；纳米粒；非病毒基因载体；基因转染 表有限公司)；荧光显微镜(Olympus，日本)；离心机 (80-1型，上海浦东物理光学仪器厂)；激光纳米粒 将目的基因转入靶细胞并使其表达是基因治疗 度测定仪(SIZE3000HSA型，英国)。 的关键，虽然病毒性载体如反转录病毒、腺病毒、腺 1．3右旋糖苷衍生物纳米粒的制备【41 相关病毒、牛痘病毒等可以将基因转人细胞，并且可 1。 1．3．1合成路线见Fig 获得较高的转染效率，但是病毒性载体存在体内毒 性、免疫原性等安全性问题…，特别是1999年基因 治疗临床试验中，出现首例运用腺病毒载体致人死 亡的事件后，人们对病毒载体的应用更加谨慎心，3]， 美国许多研究机构已停止使用该类载体。因此安全 无毒的非病毒性载体成为基因载体领域研究的热点 之一。我们以乳腺癌细胞为靶细胞，绿色荧光蛋白 基因为报告基因，考察了不同条件下生成的右旋糖 苷衍生物纳米粒对乳腺癌细胞的转染作用，从而确 立了制备载体的优化条件。 1材料与方法 1．1 试剂 右旋糖苷40(匈牙利，批号 033K1304)；高碘酸钠(Sigma公司，批号