发酵乳杆菌菌株多相分类鉴定.pdfVIP

发酵乳发酵乳杆菌菌株的多相分类鉴定杆菌菌株的多相分类鉴定 发酵乳发酵乳杆杆菌菌株的多相分类鉴定菌菌株的多相分类鉴定 杨振宇，高学军，王庭柱 东北农业大学教育部乳品科学重点实验室 （150030 ） E-mail: lili820416@126.com 摘摘 要：要：对 9株发酵乳杆菌菌株 （2株德氏乳杆菌保加利亚亚种、1株德氏乳杆菌德氏亚种、 摘摘 要要：： 3株嗜酸乳杆菌、1株发酵乳杆菌、1株干酪乳杆菌、1株布氏乳杆菌）进行MRS固体平板培 养基划线分离和形态学比较观察，并采用生化试验和特异性PCR 以及 RAPD 对其进行鉴定。 通过菌体常规磷钨酸负染色标本的透射电镜观察，描述了各菌体的大小、形状以及裂殖方式； 依据各菌种生化代谢差异及其代谢酶编码基因序列差异分别设计生化试验和菌种特异性 PCR引物，生化试验得到了 6个发酵型，将其鉴定为 6个菌群，而特异性， PCR扩增在菌株水 ，， 平上将其鉴定为 9 株菌 （2 株德氏乳杆菌保加利亚亚种、1 株德氏乳杆菌德氏亚种、3 株嗜 酸乳杆菌、1株发酵乳杆菌、1株干酪乳杆菌、1株布氏乳杆菌），这得到了 RAPD鉴定结果 （20个随机引物的RAPD筛选也得到了 9个不同的基因型 ）的验证。实验还获得了 5个种特 异性 PCR引物德氏乳杆菌保加利亚亚种的 LbdbmanLF-R 、干酪乳杆菌的 LbcmanNF-R 、嗜酸乳 杆菌的 LbarbsK1F-R、发酵乳杆菌的 LbpmelAF-R 、德氏乳杆菌德氏亚种的 LbddlacZF-R.以及可 能是嗜酸乳杆菌菌株AS 1.2467 的株特异性的 PCR引物 LbamanNF-R 。 关键词关键词：德氏乳杆菌保加利亚亚种： ，德氏乳杆菌德氏亚种，嗜酸乳杆菌，发酵乳杆菌， 关键词关键词：： 干酪乳杆菌，电镜，生化鉴定，PCR 1. 引引 言言 引引 言言 乳杆菌 （Lactobacillus ），在全世界的工业应用中占有重要的作用，可作为发酵乳的发 酵剂。有一些乳杆菌株是益生菌，常用于新鲜的发酵产品或囊形保健品 （如冻干粉）中，在 人和动物胃肠道以及许多食品、饲料和饮料的制作过程中起主要作用[1,2] 。 德氏乳杆菌 （Lact. delbrueckii ），依据生态学生境和发酵性能的差异，依据生态学生 境和发酵性能的差异，可将其分为三个亚种：常用于蔬菜发酵的德氏亚种 （Lact. d. delbrueckii ）以及目前用于乳品的保加利亚亚种 （Lact. d. bulgaricus ）和乳酸亚种 （Lact. d. lactis ），后两者与其它微生物，如嗜热链球菌 （Streptococcus thermophilus ）和嗜酸乳杆菌 （Lact. acidophilus ）一起广泛地应用于Yogurt 、发酵乳以及乳酪的制造工业中[3,4] 。干酪乳 杆菌 （Lactobacillus. casei ）群含有许多重要的益生菌株，如 Lact. casei Shirota 和 Lact. rhamnosus GG ，它们可见于初乳中，特别是在成熟乳酪中大量存在[5,6] 。布氏乳杆菌 （Lact. buchneri ）是在酒发酵过程中的害菌或酸败菌，此外，Lact. buchneri 在酵母、发酵淀粉、乳 酪、橄榄发酵和青贮饲料中也常见。近年来，越来越多的证据表明，食品工业和胃肠微生物 学者需要灵敏可靠的方法，来确定和分析食品中及宿主胃肠道中微生物的含量，尤其是对 LAB （特别是乳杆菌和双歧杆菌）的关注，这主要是因为：（i ）这些微生物有益于健康； - 1 -