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PAGE \* MERGEFORMAT２５ 2-4_基因轉殖技術及應用 重組DNA－基因轉殖的關鍵技術 定義與目的： 定義：將兩段不同來源的DNA，組合在一起的一段新DNA，此段重新組合的DNA即稱為重組DNA。 目的：將此重組DNA植入生物細胞，以改變該生物的性狀表徵，此具有重組DNA的生物即稱為基因轉殖生物。 操作原理： 所需物質 定義與功能 目標基因(外源基因) 定義：欲轉殖到其他生物的帶有可合成人類所需蛋白質的 DNA片段。 來源：可取自生物或人工合成。 舉例：如將人類胰島素基因轉殖至大腸桿菌，則人類胰島素基因即目標基因。 載體 功能：攜帶目標基因進入欲轉殖生物的細胞。 條件：本身也是DNA 分子，須帶有特定基因，如螢光基因、抗抗生素基因等以供篩選。 常見的載體：細菌的質體、DNA病毒。 限制酶 可切割載體和目標基因的酵素。 可辨識並切斷特定的 DNA 序列。 DNA連接酶 可將載體和目標基因接合的酵素。 可連接 DNA 片段。 過程： 切下目標 DNA：利用同一種限制酶切割載體與目標 DNA。 目標 DNA：通常來自動物、植物、微生物或人工合成的 DNA。 連接、重組：將目標 DNA 與載體 DNA 混合，並以DNA 連接酶將兩者連接，構成重組 DNA 分子。 細菌的質體 有些細菌的細胞內除了染色體的 DNA 外，尚有較小的環狀 DNA，此 DNA 稱為質體。 質體具有抗藥性等與一般生理無關的基因，在自然狀態下可轉移到其他的細菌體內，因此常被作為轉殖基因的工具。 DNA 載體 功能：為 DNA 載具，將目標 DNA 送入細胞內。 特性：可在細胞內複製，連帶使目標 DNA 量增加。 操作過程 製作載體 目標基因 載體： 負責將目標基因送至宿主DNA，需帶有特定基因。 如螢光基因、抗抗生素基因等以供篩選。 常見的載體為病毒的 DNA、細菌的 質體。 目標基因： 又稱為外源基因，可來自生物體或利用人工方式合成。 欲轉殖人類胰島素基因至大腸桿菌中，則人類的胰島素基因即為目標基因。 限制酶 的切割 利用相同的限制酶切割載體及目標基因。 限制酶能辨識特定的核苷酸序列，在特定的位置切開。 如在GAATTC的G與A切開，切開後成為單股黏性端。 重組DNA 利用DNA連接酶將載體與目標基因接合。 例如：人類胰島素基因與細菌載體接合。 載體與目標基因接合後所形成的DNA，稱為重組DNA。 轉殖 將重組DNA送入宿主細胞(例如：大腸桿菌)中。 選殖 利用載體的特定基因進行選殖。 例如：若載體帶有特定抗抗生素基因，則可在培養基中加入抗生素，若細菌能在含有抗生素的培養基中存活，及代表大腸桿菌含有含有重組DNA，此大腸桿菌及為基因轉殖細菌。 基因表現 基因轉植成功的生物，可利用轉殖的基因，經轉錄、轉譯作用合成基因產物。 基因轉殖技術的應用 基因轉殖技術：利用重組DNA的技術，將選取的目標基因植入特定的生物細胞內，以改變該生物的遺傳訊息，進而改變該生物性狀的表現。 基改生物(簡稱為GMO)：利用基因轉殖技術培育出來的生物，例如基因轉殖細菌、基因轉殖植物、基因轉殖動物等。 基因轉殖技術的應用：基因轉殖技術的應用非常廣泛，包含醫學、農業、畜牧業、食品工業、化工業等相關領域。 基因轉殖微生物的應用： 利用基因轉殖的細菌製造胰島素或紅血球生成素。 利用基因轉殖的酵母菌製備B型肝炎疫苗。 科學家已研究出一種基因轉殖細菌，能有效清除油船漏油，解決其汙染問題。 基因轉殖植物的應用： 品種改良以提高作物產量。 培育抗蟲、抗病、抗旱及種子富含胡蘿蔔素的植物。 基因轉殖動物的應用： 將含有外源基因的重組DNA嵌入動物的受精卵或早期胚胎，將來發育成的動物稱為基因轉殖動物。 目前已利用基因轉殖動物生產具有經濟及醫療價值的產品，例如：轉殖山羊的乳汁中含有人類的凝血因子或血纖維酶。 轉殖生長激素基因於鮭魚和鼠體內可以促進其生長。 應用領域 舉例 醫學 利用基因轉殖生物(包括細菌、真菌、動物和植物)，生產藥物和疫苗。 如利用基因轉殖的大腸桿菌生產胰島素以治療糖尿病、 利用基因轉殖的酵母菌生產B型肝炎疫苗。 利用基因轉殖的綿羊生產具有胰蛋白酶抑制劑的羊乳，用於治療肺氣腫等。 農業 利用基因轉殖的技術改造植物的基因，以提高農作物營養價值、提高農作物抵抗病菌的能力、減少農作物的病蟲害等。 提高農作物營養價值：例如：增加稻米中離氨酸的含量，以補充人體的必須胺基酸。 提高農作物抵抗病菌的能力：例如：將菸草鑲嵌病毒的外殼蛋白基因，轉入到菸草的細胞中，使這種具有病毒的外殼蛋白基因的作物，能夠抵抗病毒；利用類似的方法也可產生抗細菌、真菌、病毒的馬鈴薯和水稻等農作物。 減少農作物的病蟲害：例如：蘇力菌會產生一種能殺害毛毛蟲的毒蛋白，將蘇力菌產生毒蛋白的基因轉殖於農