南京地区健康犬被毛真菌的分离培养和菌群调查.pdf

南京地区健康犬被毛真菌的分离培养与菌群调查 1 1 2 1 1，2 李天伟 ，芮荣 ，宋旭东 ，马琪 ，宋大鲁 1南京农业大学动物医学院，南京(210095) 2 师皇宠物医院，南京(210095) E-mail ：rrui@ 摘 要：本研究旨在通过对犬被毛真菌的分离培养与鉴定，调查真菌在犬体的分布规律。采 用分点采毛法，分别从80 只健康犬的8 个部位采集毛样，进行真菌分离培养。结果表明， 供试犬的真菌检出率为 100%。在全部640 个被毛样本中，共分离真菌598 株；未检出真菌 的样本152 个，占样本总数的23.8%。絮状表皮癣菌、红色毛癣菌和马拉色菌的检出率分别 为9.9%、6.4%和6.0%。 关键词：犬；被毛；真菌；分离 犬皮肤真菌病在兽医临床上是一种常见病和多发病。致病真菌过量黏附于犬的皮肤上， 侵入皮肤毛发或趾甲，寄生或腐生于表皮、毛发、甲板的角质蛋白组织中，并大量增殖，引 致皮肤发生一系列器质性病变[1] 。其临床症状主要表现为皮肤上出现界限明显的脱毛圆斑， 皮肤瘙痒，潜在性皮肤损伤，具有渗出液、鳞屑或结痂等；若伴发细菌感染则可形成脓癣。 发病特点是病程长、治愈难、易复发，并可在动物之间，人与人、人与动物间互相传播，造 成严重的公共卫生问题。该病多发于幼龄犬、老龄犬和体质衰弱、机体抵抗力较低的犬。难 于防治的部分原因，要归咎于缺少明确的诊断。目前，国内宠物医院在条件上仍缺少专门的 真菌化验室和检测技术人员，真菌拟似病例仅能作简单镜检；大多依靠经验诊断该病，诊断 依据不足，病原无法定性，易造成对真菌病甚或严重的真菌感染的迟诊、漏诊、误诊，直接 影响到临床治疗。总的看来，国内兽医界对动物真菌病的关注不够、研究较少。 为了查明真菌在健康犬的体表分布和种类，帮助正确认识犬皮肤真菌病的发生、发展规 律，了解皮肤微生态环境及这种微生态环境对真菌感染发病的影响。本研究试图建立犬被毛 真菌的分离培养方法，调查真菌在犬体的分布规律，以期为病原真菌的检测和鉴定、为该病 的临床诊疗提供参考。 1 材料与方法 1.1 供试动物 供试健康犬随机取自预防接种时无临床疾病、无皮肤病症状的居民饲养犬。 1.2 真菌培养基 1.2.1 沙氏葡萄糖蛋白胨培养基（GPA ） 又称沙堡琼脂，成分为葡萄糖40.0 g，蛋白胨10.0 g ，琼脂18.0～20.0 g，加蒸馏水至 1000 mL 。制备时先将琼脂加热溶解于水中，再加入其它成分，溶解并充分混匀后分装，116℃ 30 min灭菌备用。该培养基是分离、培养及鉴定病原性真菌与放线菌的常规培养基；为减少 细菌干扰，可添加抗生素（20µg/mL青霉素和40µg/mL链霉素，或40～50µg/ml庆大霉素； 添加剂量不宜过大，以免放线菌受到抑制）。添加1 g/L维生素B1，可促进紫色毛癣菌和断发 [2] 毛癣菌生长；添加5 g/L酵母浸膏，可促进皮肤丝状菌生长 。 1.2.2 皮肤癣菌鉴别琼脂（DTM ） 组成成分为葡萄糖10.0 g ，蛋白胨10.0 g ，琼脂20.0 g ，加蒸馏水至1000mL ，0.02%酚 -1- 红6 mL ，0.8mol/L盐酸6 ml，氯霉素40 mg ；可添加氯霉素0.5 g及放线菌酮0.5 g 。制备时， 将蛋白胨、葡萄糖及琼脂加入1000ml水内，混合均匀；不断搅拌加热煮沸，使之完全溶解； 再依次加入酚红、盐酸、放线菌酮及氯霉素。于116℃ 10 min高压灭菌后，在水浴中冷却至 47～50℃备用。它是一种选择性培养基，放线菌酮可抑制多种常见霉菌，氯霉素可抑制大多 数细菌的污染。酚红可检出皮癣菌及有关真菌的产酸能力，属鉴别培养基。有些非皮癣菌可 产生阳性（红色）颜色反应[3] 。 1.2.3 马铃薯葡萄