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实验十 从自然界中分离筛选优良微生物菌种 实验目的 学会用倾注（涂布）法从甜酒曲中分离纯化优良根霉糖化菌株。 二．实验原理 甜酒药中的米根霉是优良的糖化菌种，有时也见华根霉。本实验采用平板涂布法从甜酒曲中分离纯化优良的根霉糖化菌株，为制备纯种甜酒曲提供优良的菌种。 实验材料及用具 材料 安琪甜酒曲、马铃薯葡萄糖琼脂培养基（PDA)、牛肉膏蛋白胨培养基（PCA)、孟加拉红培养基、生理盐水 用具 涂布器、酒精灯、具塞试管、移液枪 实验流程 取样→10倍梯度稀释→0.1mL涂布PDA平板、PCA平板、孟加拉红平板（倾注2板）→28℃恒温培养3d观察结果 ?在电子天平上取2.0g安琪酒曲; ?将酒曲倒入盛有8mL无菌生理盐水的具塞试管中，震荡均匀，制得10-1稀释液，然后用移液枪移取1mL10-1稀释液于另一管盛有9ml无菌生理盐水的试管中，制得10-2稀释液，同理依次制得10-3、10-4、10-5稀释液； ?用移液枪分别移取各稀释度菌液0.1ml,注入已经冷却的PDA平板、PCA平板和孟加拉红平板上，用稀释涂布器涂抹均匀，另用倾注法制作2个孟加拉红平板； ④将制作好的平板写上名称、组别及日期，置于28℃恒温培养箱中培养3d,观察结果。 实验结果 PCA平板： 现象：培养基表面布满大量扩散性生长菌落，呈蜘蛛网状，相互连接交错，菌丝发达 现象：相较于10-1稀释度平板，此平板中间大部未有菌落生长，只在平板边缘两处有菌落出现，生长情况良好。 分析：10-1稀释度应该是此次分离甜酒曲中根霉的最适浓度，因为当稀释到10-2时，平板上几乎没有大量菌落生长。 PDA: 现象：在三个连续梯度的平板中，10-1、10-3中均有菌落生长，其中10-1中有大量菌落，10-3中菌落较少，而10-2平板中却几乎没有可见菌落。 分析： 接种过程中，10-2平板可能未冷却至46℃，以致温度过高将菌液中的微生物全部烫死。 孟加拉红培养基： 注意事项： ?操作过程中应严格遵守无菌操作； ?注意在接种前一定要待培养基完全冷却，以免菌种被烫死； ?培养时将平板倒置，以免冷凝水滴入培养基内，冲散菌落。