磷酸钙共沉淀支架与人脂肪间充质干细胞构建新型组织工程化骨.PDF

北 京 大 学 学 报 医 学 版 论著 骨形态发生蛋白 磷酸钙共沉淀支架与人脂肪 间充质干细胞构建新型组织工程化骨 姜蔚然 张 晓 刘云松 吴 刚 葛严军 周永胜 北京大学口腔医学院 口腔医院修复科 口腔数字化医疗技术和材料国家工程实验室 口腔数字医学北京 市重点实验室 北京 摘 要 目的构建可缓释骨形态发生蛋白 的仿生磷酸钙 共沉淀三维支架 检测其 理化特性探究其对人脂肪间充质干细胞 体内外成骨分化的影响最终构 建以和为基础的新型组织工程化骨 方法构建三维缓释支架扫描电子显微 镜观察表面形貌体外检测其缓释能力 将颗粒分别浸泡于增殖培养基 与成骨诱导培养基 中每 天提取上清液用于的体外培养 实验检测各组 的体外增殖能力诱导 及 后进行碱性磷酸酶 染色及活性定量检测 及 进行茜素红染色及矿化沉积定量分析 及 检测成骨相关基因的表达情况 体内实验使用 只裸鼠 于其背部正中做皮肤切口向两侧共分离出 个皮下植入腔分别植入单纯支架 支架 缓释支架 缓释支架实验组 植入 周后取材标本制成组 织学切片进行染色观察 结果表面由不规则晶体组成三维立体多孔结构孔直径约为 加入 后不影响原有的立体结构 缓释曲线结果显示蛋白质在前 天释放速度较快随后释放速度放缓 并于 后趋于平稳之后每天释放量较稳定至第 天仍有少量释放累积释放量达 结果显示 缓释支架不会影响的早期增殖 诱导 与 后组染色及活性 定量检测均显著高于其他组 诱导 后 组矿化结节染色及钙沉积定量检测均 高于其他组 诱导 时组的相关转录因子 基因 与基因表达水平较对照组显著升高 诱导 时 骨桥蛋白 和骨钙素 基因表达量均显著高于其他组 染色分析可见实验组和 缓释支架组中细胞外基质呈强嗜酸性出现类似骨陷窝的结构并可见包含其中的类骨细胞 与 缓释支架组相比实验组的细胞外基质嗜酸性更强类骨组织的面积更大结构更加典型其他组未见矿化 基质和类骨组织形成 结论支架能够实现 的良好缓释并能显著促进的体内外成骨 分化以和为基础构建的新型组织工程化骨具有潜在的应用前景 关键词 骨形态发生蛋白质类磷酸钙类沉淀人脂肪间充质干细胞组织工程 中图分类号 文献标志码 文章编号 基金项目 国家自然科学基金 和北京大学口腔医院青年科研基金项目 资助 网络出版时间 网络出版地址 姜蔚然等骨形态发生蛋白磷酸钙共沉淀支架与人脂肪间充质干细胞构建新型组织工程化骨