医用分子秒遗传学真核基因转录调节.pptVIP

甾 体 类 激 素 受 体 甾 体 类 激 素 受 体 转 录 活 化 域    （三）mRNA 转录激活及其调节 polⅡ TFⅡH TAF TFⅡF TAF TAF TFⅡA TFⅡB TBP 真核RNA聚合酶Ⅱ在转录因子帮助下，形成的转录起始复合物。TF II D是唯一具有位点特异的DNA结合能力的因子。 TATA DNA TBP相关因子 是细胞特异的，与转录激活因子共同决定组织特异性转录 研究真核生物基因转录调控的方法 体外： 1.DNase I 的敏感位点 2.Gel Shift (EMSA) 3.Footprint 体内： 1.Traisent Transfection 2.Establish stable cell line    Identification Cofactors of C/EBPb by SILAC Identification of Target Genes by ChIP Promoter Array 第 三 节  真核基因转录调节 Regulation of Eukaryotic Gene Transcription 一、真核基因组结构特点 （一）真核基因组结构庞大 哺乳类动物基因组 DNA 约 3 × 10 9 碱基对 编码基因约 有 40000 个，占总长的1 % rDNA等重复基因约 占 5% ~ 10% （二）单顺反子 单顺反子(monocistron) 即一个编码基因转录生成一个mRNA分子，经翻译生成一条多肽链。 （ 三）基因不连续性 染色体水平DNA的活化 转录的起始 hnRNA 的剪切和加工 mRNA 转移到胞浆 翻译 二、真核基因表达调控特点 二、真核基因表达调控特点 （一）多种RNA聚合酶 （二）活性染色体结构变化 （三）正性调节占主导 （四）转录与翻译分隔进行 （五）转录后修饰、加工 2. DNA拓扑结构变化 天然双链DNA均以负性超螺旋构象存在； 基因活化后 RNA-pol 正超螺旋 负超螺旋 转录方向 1. 对核酸酶敏感 活化基因常有超敏位点，位于调节蛋白结合位点附近。   3. DNA碱基修饰变化 真核DNA约有5%的胞嘧啶被甲基化， 甲基化范围与基因表达程度呈反比。 1.mCpG是真核生物甲基化的唯一形式 2.基因表达与CG甲基化程度呈负相关，甲基化以后可加强阻遏蛋白或降低激活蛋白与DNA的结合 3.DNA甲基化对转录的抑制主要决定于甲基化CpG的密度和启动子强度 DNA Methylation and Transcription 5` 3` 5` 3` 4. 组蛋白变化 富含Lys组蛋白水平降低 活性的核小体常缺乏H1，但却结合有非组蛋 白HMG－14和HMG－17的存在 ② H2A, H2B二聚体不稳定性增加 组蛋白修饰 H1组蛋白磷酸化，对DNA亲和力低 核心组蛋白的修饰，乙酰化，磷酸化 ④ H3组蛋白巯基暴露 三、RNA pol I 和pol Ⅲ的转录调节 RNA pol I转录产物只有rRNA前体，有2个顺式作用元件（-45~+20bp核心元件，-156~-107bp上游控制元件UCE），需两种转录因子来正确有效地帮助起始转录（上游结合因子1和选择性因子1）。 RNA pol Ⅲ对tRNA和5S rRNA基因的转录调节，启动子在转录区内。 tRNA有2种转录因子， 5S rRNA有3种转录因子，但都只有TFⅢB才是真正的转录起始因子，在定位RNA pol方面起重要作用。 四、RNA pol II转录起始的调节 1.由10－12个亚基组成 2.最大亚基的C末端含有可磷酸化位点的氨基酸残基（Tyr-Ser-Pro-Thr-Ser-Pro-Ser）重复序列，称为CTD（Carboxyl Terminal Domain） 3.CTD是TFII－H的底物，磷酸化后与RNA链延伸有密切关系 （一）顺式作用元件 1. 启动子 真核基因启动子是RNA聚合酶结合位点周围的一组转录控制组件，至少包括一个转录起始点以及一个以上的功能组件。 TATA盒 GC盒 CAAT盒 2. 增强子(enhancer) 指远离转录起始点、决定基因的时间、空间特异性、增强启动子转录活性的DNA序列。 3. 沉默子(silencer) 某些基因的负性调节元件，当其结合特异蛋白因子时，对基因转录起阻遏作用。 定义：是能直接或间接地识别或结合在各顺式作用元件核心序列上，参与调控靶基因转录速率的一组蛋白质。 结构：至少含有DNA结合域和转录活性区域 （二）反式作用因子 （二）反式作用因子 1. 转录调节因子分类（按功能特性） * 基本转录因子(general transcription factors)