心肌内注射17β-雌二醇纳米粒的促血管生成效应与相关机制研究.pdfVIP

心肌内注射17β-雌二醇纳米粒的促血管生成效应及相 关机制研究1 刘伟强，陈玉成，熊素彬，曾智* 四川大学华西医院心内科，成都（610041 ） E-mail ：chenyucheng2003@126.com 摘 要：目的 评价心肌内局部肌注聚乳酸和乙醇酸共聚物(poly-dl-lactic-CO-glycolic acid,PLGA)纳米粒包载的17β-雌二醇对大鼠急性心梗后心肌血管生成的影响及其作用与内 源性雌激素的关系。方法 乳化/液体蒸发法制备17β-雌二醇纳米粒,检测其理化性质和体外药 物释放参数.制备大鼠急性心梗模型,分为去卵巢心梗治疗组(ET组:在梗死区边缘注射17β-雌 二醇纳米粒4mg/100g ),去卵巢心梗对照组(OMI组),正常卵巢心梗对照组(MI组).1月后免疫组 化法检测心梗边缘区毛细血管密度(microvascular density,MVD) 及eNOS蛋白表达,放免法检 测血清17β-雌二醇浓度.结果 体外释放参数显示,17β-雌二醇可从PLGA纳米粒载体中持续释 放1月;心梗1月后免疫组化法显示ET组毛细血管密度、eNOS蛋白表达均比MI组显著增加 (P0.05),MI组与OMI组间也有显著差异(P0.05)。结论 内源性雌激素缺乏负面影响心肌毛细 血管生成.心肌内局部注射17β-雌二醇纳米粒可不依赖于内源性雌激素存在而促进大鼠梗死 后心肌毛细血管生成,其机制可能与增加eNOS蛋白表达有关. 关键词：心肌梗死；雌二醇；血管生成 内源性雌激素对女性有降低低密度脂蛋白、抗动脉粥样硬化、扩张血管等心脏保护作用 [1],绝经后女性冠心病发病率显著上升,成为其死亡的主要原因之一.动物实验表明皮下注射 17β-雌二醇有较好的促心肌血管生成作用[2,3],但临床随机对照试验却未能得出雌激素治疗使 女性冠心病患者获益的结果[4,5] [6] .雌激素对女性具有非常复杂的生物学效应 ,如何能更好的 发挥其正面效应仍需探索,提高局部靶器官有效药物浓度同时减少非心血管系统不良反应可 能将是今后治疗的发展方向.而目前雌激素的研究多局限于口服或皮下注射等全身用药方式, 局部心肌内应用 17β-雌二醇是否能促进心肌毛细血管生成及其作用与内源性雌激素的关系 尚不清楚.我们利用纳米技术制备具有良好缓释作用和组织穿透能力的17β-雌二醇纳米粒,心 肌内局部注射,探讨其对大鼠急性心梗后心肌毛细血管生成的影响及与内源性雌激素的关 系。 1 对象和方法 1.1 器材 3 月龄健康SD 雌鼠( 四川大学华西实验动物中心)质量200±20g;17β-雌二醇（Sigma）;PLGA （50:50,分子量5万, 山东省医疗器械研究所）;兔抗大鼠eNOS 多克隆抗体、兔抗人VIII 因子相 关抗原抗体( 武汉博士德公司); 雌二醇放免试剂盒( 北方生物所);HX-300 小动物呼吸 机;AMRAY-1000B 扫描电镜(中科院科学仪器厂);数显恒温磁力搅拌器（78HW-1,杭州仪表电 机有限公司）;水浴恒温振荡器（THZ-82 常州国华电器有限公司）;高速冷冻离心机（Beckman Allegra 64R ）;紫外分光光度计（Heλios-γ,Thermo ）。 1.2 17β-雌二醇纳米粒的制备 取PLGA 和17β-雌二醇（17β-雌二醇:PLGA=1:10）,加二氯甲烷- 甲醇（30:1 ）溶解,配制成含 PLGA 3mg/ml 的浓度,作为油相.取PVA 和DMAB （DMAB:PVA=3:100 ）溶解于双蒸水中, 1本课题得到教育部博士点基金“心肌内注射雌激素血管生成效应及相关机制研究”（20040610057 ）的资助。 - 1 - 配制成含PVA 1% 的溶液,作为水相.按油相:水相=1:3 比例将油相注入水相中,磁力搅拌