肿瘤标志物临床柳检测的基本原则.pptVIP

六、TM常用的检测方法 1 放射免疫测定: 灵敏度高 、但特异性差，阳性率较高，且方法繁琐、测定时间长。 2 酶联免疫吸附试验(ELISA)： 应用较广、费用较低 ，但手工ELISA方法仍繁琐 ，定量测定不够精确；全自动酶免分析仪,可在一定程度上解决反应时间、温度、洗涤力度等标准化问题，减少人为误差。 3 自动化仪器测定: 如全自动快速微粒子酶免疫分析系统、时间分辨免疫荧光分析技术，全自动化学发光（Chemiluminescence)分析系统和电化学发光(Electrochemiluminescence)分析系统 ，这类方法测定速度快、精度高，但仪器和试剂的成本较高，经济欠发达地区和标本量较少的实验室难以开展。 4、聚合酶链反应（polymerase chain reaction PCR） 基本原理：类似于DNA的天然复制过程，其特异性依赖于靶序列两端互补的寡核苷酸引物。 PCR由变形—退火—延伸三个基本反应步骤构成。 肿瘤研究中的分子生物学检测 癌症的病理从分子生物学角度看，主要是多阶段，多步骤的累积性的DNA突变或损失发生调控细胞分化生长功能的基因所造成的。 一般表现为：原癌基因激活，抑癌基因抑制，妨碍DNA复制修复的稳定性。其DNA改变可包括：基因突变、缺失、扩增、DNA重排，非正常基因融合及对DNA核苷酸修饰等。 除抑癌基因外，还可以研究多种致癌基因，抗肿瘤药物的耐药性等多种课题。分子生物学技术可广泛用于肿瘤的检测中。 七.TM测定的影响因素 1．肿瘤的大小和肿瘤细胞的数量。 2．肿瘤细胞合成和分泌肿瘤标志物的速度 3．肿瘤组织的血供情况 4．肿瘤细胞是否有坏死和坏死的程度 5. 肿瘤细胞的分化程度和肿瘤的分期 6. 肿瘤细胞是否表达和合成肿瘤标志物 7. 肿瘤标志物在体内的降解和排泄速度 1.体内因素: 1)肝肾功能异常和胆汁淤积等可造成TM浓度增高。 2）风湿病时CA19-9浓度可升高。 3）强烈的治疗作用（如手术、放疗、化疗）和连续的细胞死亡、肿瘤部位供血障碍等均可导致TM浓度变化。 4）某些药物会影响TM的浓度，如前列腺癌抗雄激素治疗可抑制PSA的产生。 5）直肠和肛检可致PSA和PAP升高。 2.体外因素: 1)血液的稀释作用可使TM的阳性率下降,如直接采集肿瘤组织或其附近组织分泌的体液进行测定可提高检测灵敏度和特异性。 2）红细胞、浆细胞和血小板中存在NSE，因此未及时分离血清的标本有可能使血清NSE浓度升高。 3）血清放置于室温中有些TM如PAP可因其不稳定而降解。 4）CA15-3对蛋白酶和神经酰胺酶很敏感，应避免微生物的污染，以免影响测定结果。 5）“Hook”效应的影响。 6）同一病人甚至同一份血清使用不同的试剂盒测定，有时结果会相差很大。 其原因可能是由于使用的抗体同一抗原的不同位点所致。即使使用完全相同的统一抗体，也可能因抗原的异质性（如原发肿瘤转移后，失去了原有的抗原性），影响了结果，造成了假象，这种现象特别容易发生在疗效评价中，尤其在使用前一种试剂盒测定的值作为后一种试剂盒的参考值时。因此用一种新的试剂盒时，应对病人标本进行2－3次的对照测定。 7)异嗜性抗体的影响:大多数的TM试剂盒使用两种鼠的单克隆抗体,如血清中出现嗜异性抗体,特别是已知的人抗鼠嗜异性抗体时,可能在两种鼠的单抗间起“桥梁”作用,导致假阳性。避免的办法是在样品中事先加入鼠的IgG,用PEG沉淀 ,去除嗜异性抗体,或进行其他的预处理。 八.肿瘤标志物的临床价值评价 1.灵敏度或敏感性（SE）： 是指该指标的真阳性率或阳性率，或是指肿瘤患者的TM阳性率； 灵敏度＝真阳性数／真阳性数＋假阴性数×100％ ＝真阳性数／被检病人总数× 100％ 如：在100例肿瘤病人中检测结果70例病人为阳性，则其灵敏度为70／100，即70％，其中30例为假阴性。 2.特异性（SP）： 是指该指标的真阴性率或阴性率，或是指非肿瘤患者的TM阴性率； 特异性＝真阴性数／真阴性数＋假阳性数× 100％ ＝真阴性数／对照组总数× 100％ 如：对100例对照人群进行检测，结果发现97例为阴性，则其特异性为97／100，即97％，其中97例为真阴性，3例为假阳性。 特异性往往随着选择不同的对照组而不同。 3.有效性(efficiency)或称准确度 指的是该项指标在全部测定人群中真阳性与真阴性之和所占全部测定人数的比率。反映该TM能准确区分肿瘤与非肿瘤患者的能力. 准确度=真阳性数+真阴性