食源性致病菌检验标准操作程序.docVIP

PAGE PAGE \* MERGEFORMAT2 食源性致病菌检验标准操作程序 福建省疾病预防控制中心 二〇一二年十一月  生物样本检验标准操作程序 粪便样本的保存、运送和检测 表1 粪便样本的保存、运送和检测培养条件 培养基 目标病原体 温度 细菌标本保存和运送 1. Cary－Blair 所有食源性致病菌 室温 增菌液 1. 改良磷酸盐缓冲液 小肠结肠炎耶尔森氏菌 4 2. mEC增菌肉汤 EHEC O157:H7/STEC 37 3. Preston肉汤 弯曲菌 微需氧42 4. SBG增菌液 沙门氏菌 37 5. 3%氯化钠碱性蛋白胨水 弧菌 37 选择性分离平板 1. Mac平板 EPEC、STEC、ETEC、EIEC、EAEC、志贺氏菌 37 2. XLD平板 志贺氏菌 37 3. mCCD平板 弯曲菌 微需氧42 4. 耶尔森氏菌选择性平板 小肠结肠炎耶尔森氏菌 25 5. 科玛嘉O157:H7显色平板 EHEC O157:H7 37 6. 科玛嘉沙门氏菌显色平板 沙门氏菌 37 7. 科玛嘉弧菌显色平板 TCBS平板 弧菌 37 病毒标本 1. 采便盒 轮状病毒、诺如病毒、札如病毒、星状病毒、腺病毒 -20 PAGE \* MERGEFORMAT85 检验方法与流程 沙门氏菌和志贺氏菌检测操作程序 范围 本程序规定了粪便标本中沙门氏菌（Salmonella）和志贺氏菌（Shigella）的检验方法。 检验程序 沙门氏菌和志贺氏菌检验程序见图1。 36 ℃ 36 ℃±1 粪便或肛拭子 挑取3个或以上可疑菌落，接种于5％羊血琼脂平板 报告 进行系统生化鉴定、血清学试验 TSI，赖氨酸，MIO，西蒙氏柠檬酸盐琼脂，尿素 SBG增菌液 XLD和MAC 36 ℃±1 36 ℃±1 直接 科玛嘉沙门显色培养基 TSI:K/Ag++ 赖氨酸:+ MIO:+/-/+ 柠檬酸盐:+ 尿素:- TSI:K/A tr 赖氨酸:+ MIO:+/-/- 柠檬酸盐:- 尿素:- TSI:K/Ag 赖氨酸:- MIO:+/-/+ 柠檬酸盐:- 尿素:- TSI:K/A 赖氨酸:- MIO:-/V/- 柠檬酸盐:- 尿素:- 反应结果与左侧描述不符 TSI:K/A 赖氨酸:- MIO:-/-/+ 柠檬酸盐:- 尿素:- 沙门氏菌属 伤寒沙门氏菌 甲型副伤寒沙门氏菌 志贺氏菌属 宋内志贺氏菌 可能是肠道菌群，或者需要额外试验以排除其他致病菌或生化不典型的沙门氏菌或志贺氏菌分离株 36 ℃±1 沙门氏菌和志贺氏菌检验程序 操作步骤 标本收集 标本包括新鲜的或转移至Cary-Blair运送培养基的粪便或肛拭子。最优标本是转移至Cary-Blair运送培养基的粪便拭子。肛拭子不是最佳标本，仅在病人无粪便标本时采用。肛拭子收集后应当目测，需要在拭子上明显见到粪便。 所采集的标本尽快检验，放入Cary-Blair运送培养基中的标本应在冷藏条件下24 h内送检。新鲜的粪便标本置于清洁、干燥、无肥皂或消毒液残留的容器中，冷藏条件下8 h内送检。 分离培养 直接分离培养 新鲜粪便：无菌拭子采集少量粪便，尽量从可见血或黏液的部位收集；新鲜拭子在XLD和MAC一区划线；以1 μL无菌接种环或接种针划线分离。在标本中再插入一个清洁的无菌拭子，将拭子放入SBG增菌液。轻拧管盖。注意：拭子表面有一层标本即可，不可将过量的标本放入SBG增菌液。 肛拭子：操作程序同新鲜粪便。 转移至Cary-Blair运送培养基的粪便拭子：轻搅混合标本；拭子在XLD和MAC一区划线；以1 μL无菌接种环或接种针划线分离；在标本中再插入一个清洁的无菌拭子，将拭子放入SBG增菌液。轻拧管盖。注意：拭子表面有一层标本即可，不可将过量的标本放入SBG增菌液。 平板36 ℃?1 ℃培养18 增菌培养 增菌液于36 ℃?1 ℃培养18 h～24 h，采用上述方法于科玛嘉沙门氏菌显色平板上划线分离，36 ℃?1 菌落特征 选择性平板上可疑菌落的特征见表1。 沙门氏菌属和志贺氏菌属在不同选择性琼脂平板上的菌落特征 选择性琼脂平板 沙门氏菌 （大多数） 伤寒沙门氏菌 志贺氏菌属 MAC琼脂 菌落光滑、无色，直径2 mm～3 mm XLD琼脂 菌落呈红色，直径2 mm～4 mm 科玛嘉显色培养基 紫色或酒红色 紫色或酒红色 纯培养 挑取3个或以上可疑菌落，划线接种5%羊血琼脂平板，36 ℃±1 ℃ 初步鉴定 可疑菌落接种TSI琼脂，赖氨酸脱羧酶培养基、动力-靛基质-鸟氨酸琼脂（MIO）、西蒙氏柠檬酸盐琼脂和尿素琼脂。沙门氏菌属和志贺氏菌属生化反应初步鉴别见表2。  沙门氏菌属和志贺氏菌属生化反应初步鉴别表 项目 沙门氏菌 （大多数） 伤寒 沙门氏菌 甲