林荫银莲花多你倍体种质培育和离体快繁分析.docxVIP

林荫银莲花多倍体种质培育和离体快繁研究摘要 林荫银莲花多倍体种质培育和离体快繁研究 摘要 林荫银莲花(Anemoneflaccida Fr．Schmidt)属银莲花属(Anemone)，以其干燥 根茎入药，俗称地乌，具有祛风湿、助筋骨、消肿止痛等功效，开发意义巨大。在 自然条件下林荫银莲花生长期短，生物量小，种子发芽困难，野生资源有限，急需 实现人工栽培。本研究针对其种质资源缺乏的问题，以无菌苗叶片为外植体建立了 离体叶的再生体系，并初步探讨了多倍体种质培育的方法。主要研究结果如下： (I)以根茎上萌发的芽为材料，用不同浓度秋水仙素(eolchicine)作为诱导剂， 采用棉球包裹处理，然后栽培到土壤中观察形态结构变化。结果表明，以O．2％浓度 秋水仙素处理根茎萌发芽8d的诱导率最高，达81．67％，且死亡率低，是诱导多倍 体材料的可行方法。 (2)以根茎萌发芽为材料，消毒后在MS+2．0 mg／L 6-BA+0．2mg／L NAA+0．8％ 琼脂+3％蔗糖培养基上培养，然后转移到MS+1．0 mg／L 6一BA+0．3 mg／L NAA+o鼍5 mg／L KT+3％蔗糖+O．8％琼脂培养基上继代培养，再以不同浓度秋水仙素采用点滴 法和浸泡法处理再生芽。结果表明，多倍体诱导率很低，最高诱变率仅达13％左右， “ 且死亡率高，最高达81．7％。 (3)再生芽离体叶片在添加不同浓度组合的细胞分裂素类物质6-BA与生长素 类NAA的MS基本培养基上，并在光照和黑暗两种条件下培养，观察对外植体诱导、 分化的影响。结果表明，在所有处理中均无愈伤组织产生，而是直接从叶片外植体 上再生小芽；以在MS+I．5 rag／L6．BA+0．2 mg／L NAA+0．8％琼脂+3％蔗糖培养基上 黑暗条件下培养的再生芽诱导率最高，达21．67％。光照虽对叶片外植体再生芽的诱 导有一定影响，但对再生小芽数目影响不大。 (4)以添加不同浓度组合的2，4．D与6-BA的MS为培养基，并在黑暗和光照 两种条件下培养，结果显示，叶片外植体仍未被诱导产生愈伤组织，而是直接再生 出小芽；在黑暗条件下，以MS+2．5 rag／L6．BA+0．2 mg／L 2,4．D+0．8％琼脂+3％蔗糖 培养基的再生芽诱导率最高，可达28．33％；有光照条件下，再生芽诱导率略低，但 对单个叶片外植体上再生芽数影响不大。 (5)在MS基本培养基中添加O．1 mg／L 2,4．D和0．1 mg,L NAA与不同浓度6-BA 组合，并在黑暗和光照两种条件下培养叶片外植体，结果表明，在黑暗条件下，以 MS+I．5 mg／L 6．BA+0．1 mg／L 2,4．D+0．1 mg／L NAA+o．8％琼脂+3％蔗糖为培养基的 再生芽诱导率最高，可达32．78％，是目前叶片再生芽诱导的最佳培养基。光照对初 代再生芽的诱导仍有影响，但对再生小芽数量影响不大。 华中农业大学201 华中农业大学201 1届硕士研究生学位论文 (6)将叶片再生小芽继代培养4次后，去除丛生芽上的大叶片，保留新生叶， 接种到I／2MS+I．0 mg／LNAA+o．8％琼脂+3％蔗糖的生根培养基中，分别在室温(19 ±2℃)光照、室温(19±2℃)黑暗及4C黑暗下培养。结果表明，在4C黑暗下培 养生根率最高，可达70％。待根生长至0．5cm长度后，转入光下培养，可培育出健 壮幼苗。 关键词：林荫银莲花；秋水仙素；多倍体；离体快繁；植物生长调节剂 Ⅱ 林荫银莲花多倍体种质培育和离体快繁研究Abstract 林荫银莲花多倍体种质培育和离体快繁研究 Abstract Anemone flaccida Fr．Schmidt is a species of Anemone genus．The dried rhizome of A．flaccida locally named as‘Diwu”，is used as a Chinese traditional herb medicine with functions of expelling rheumatism detumescence，relieving pain,and being conducive to the physical．However,in the natural condition，the growth period of this species is very short,its biomass accumulmion is small，and seed sprouts difficultly,which result in poor natural resource．Therefore，it is very important to realize cul