医学分子生物学2015第二章rna2.pptVIP

miRNA与siRNA的比较： miRNA与siRNA的联系： * * 第四节 调节基因表达的RNA 一、RNA干扰（RNA interferenc，RNAi）的发现 1990年， Napoli矮脚牵牛花实验 Plant Cell,1990 1995年，郭苏和导师坎菲思（Kenneth Kemphues） 《Potent and specific genetic interference by double-stranded RNA in Caenorhabditis elegans》 1998年，安德鲁·法尔（Andrew Z. Fire） 克雷格·梅洛（Craig C. Mello） Nature, 1998 秀丽新小杆线虫par-1基因Cell,1995 第一篇以“RNA 干扰”命名该现象及阐述机制的文章 2001年，托马斯·塔什尔（Thomas Tuschl） 2001年，美国《科学》杂志评选 年度十大科学进展 Elbashir SM and Tuschl T. Nature,2001 第一篇探讨哺乳动物细胞中RNA干扰现象的文章 《Duplexes of 21-nucleotide RNAs mediate RNA interference in cultured mammalian cells》 2002年，美国《科学》杂志评选 年度十大科学进展之首 2001年，Bernstein E 分离鉴定果蝇Dicer 《Role for a bidentate ribonuclease in the initiation step of RNA interference》 Nature,2001 2006年，Jennifer Doudna X射线衍射晶体分析技术 《Structure basis for double-Stranded RNA processing by Dicer》 Science,2006 纯化并结晶 Giardia intestinalis Dicer 2006年，美国斯坦福大学医学院 安德鲁·法尔（Andrew Z.Fire） for their discovery of RNA interference – gene silencing by double-stranded RNA The Nobel Prize in Physiology or Medicine 2006 Andrew Z. Fire Craig C. Mello 马萨诸塞大学医学院 克雷格·梅洛（Craig C.Mello） 获得诺贝尔医学和生理学奖 二、RNA干扰 (post-transcriptional gene silencing，PTGS)的一种形式。 RNAi是指外源双链RNA进入细胞后，引起与其序列同源 的特异基因mRNA 降解的现象－－ 属于转录后基因沉默 antisense－－复制、转录翻译水平 ﹡knock-out－－DNA水平 RNAi－－转录后水平 基因沉默 优点：① 方便快捷 ② 高特异性 功能：分析特定基因在细胞内的功能。 ③ 高效性 ④ 作用广泛性 “Immune System” of the Genome ① Antiviral Defense ② Suppress Transposon Activity ③ Response to Aberrant RNAs 三、RNA干扰机制 1、启动阶段： dsRNA被Dicer逐步切割成siRNA （ small interfering RNA ） 2、效应阶段: ① Risc形成： siRNA与蛋白质聚集形成Risc （ Risc，RNA-induced silencing complex） ② Risc激活： siRNA双链解开。 ③ 激活的Risc定位到同源mRNA上， 降解该mRNA Risc Risc Risc 5` 3` 四、RNA干扰过程中的关键元件 1. dsRNA（double strand RNA） ① RNA病毒：ssRNA dsRNA RNA指导的RNA聚合酶（RNA dependent RNA polymerase,RdRp） RdRp 3`OH 5`p 5`p 3`OH 3`OH 5`p RdRp ② 人工导入dsRNA 2. Dicer RNase III家族成员－－核酸内切酶，特异性识别并切割dsRNA dsRNA结合结构域 （ dsRNA-binding domain,dsRBD） RNase III催化结构域 解旋酶结构域（helicase domain） dsRNA siRNA Dicer a front view of the