番茄环斑病毒HCRTPCRELISA检测实习.pdf

卷 期 ! # 微 生 物 学 报 %’ (! - (# 年 月 #$$ ! !#$ %’()(*(+$ ,-$ )*+,’ #$$ !!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!! 番茄环斑病毒!#$%#$#’()*+ 检测 ， = # # = = = 赵文军 安德荣 朱水芳 黄文胜 陈红运 = # （国家质检总局动植物检疫实验所 北京 =$$$# ） （西北农林科技大学 杨凌 ?=#=$$ ） 摘 要：番茄环斑病毒（ ）是我国对外检疫一类有害生物，目前国内尚无存在的报道。 DEF% G0E 技术是一种快速灵敏的植物病毒检测方法，但核酸内的聚合酶抑制物会导致漏检现象， 而只通过凝胶电泳进行结果判定会出现假阳性，这两方面限制了G0E 技术在对外检疫中的 应用。利用共价结合在G0E 管壁上的引物特异性杂交诱捕核酸粗提液中的靶标核酸，洗掉 杂质及抑制物质，在同一管内作ED/G0E，凝胶电泳检测液相产物的同时对固相产物进行杂交 检测，提高了结果的可靠性及灵敏度。利用所建立的H0/ED/G0E/2IJF) 成功地从法国进口葡 萄苗中检出DEF%。本方法还可用于其他植物病毒及转基因产品的检测。 关键词：番茄环斑病毒，植物检疫，杂交诱捕G0E 中图分类号： 文献标识码： 文章编号： （ ） F!# K = ) $$$=/L#$ #$$ $#/$=?!/$L 番茄环斑病毒（ ， ）广泛分布于欧美及大洋洲，能侵染葡萄、 D34M +,;N8*M O,+78 DEF% ［，］ 桃、苹果、樱桃、番茄及烟草等 = # =1$ 多种作物，引起多种病害，严重时导致绝产 。DEF% 为豇豆花叶病毒科线虫传多面体病毒属的成员，主要通过嫁接传播，远距离传播主要靠种 ［］ 子苗木等 。目前国内尚无存在的报道，但它适生于我国大部分地区，自然寄主遍及全 国，且许多为重要的经济作物。一旦传入，可导致严重的经济损失，因此DEF% 被我国列 为一类检疫有害生物，实施严格检疫。 反转录聚合酶链式反应（ ， ）是一 EAOA+8A M+4;8+,*M,;/*’P3A+48A 64,; +A4M,; ED/G0E ［ ］ ! Q L 种快速灵敏的核酸检测方法，被广泛应用于植物病毒的检测 。但ED/G0E 有时会出现 漏检和假阳性现象，降低了检测的可靠性。国外有报道利用杂交诱捕 （ ）检测 G0E H0/G0E ［］ 粪便中的病原微