重组人血管内皮抑素联合紫杉醇作用于c57、呢bl6小鼠lewis肺癌模型的时间窗研究.docxVIP

目 目 录 重组人血管内皮抑素联合紫杉醇作用于C57／BL6小鼠Lewis 肺癌模型的时间窗研究 1 中文摘要 1 英文摘要 5 1 实验材料 12 1．1实验动物 12 1．2实验细胞 12 2 主要试剂 12 3 实验仪器 12 4 实验方法 13 4．1建立模型 13 4．1．2 L LC细胞悬液制备 13 4．1．2建立lewis肺癌模型 14 4．2第一部分实验 14 4．3第二部分实验 18 万方数据 5 5 统计学分析 1 9 结果 20 第一部分实验 20 1各组肿瘤体积比较 20 2各组瘤重及抑瘤率 20 3免疫组化测HIF．1a和a-SMA4 22 4高效液相测紫杉醇浓度 26 第二部分实验 28 1小动物活体成像 0 0 28 讨论 · · ·29 结论 35 参考文献 36 英汉缩略词对照表 40 致谢············ ········ ········· ·41 综述 42 万方数据 重组人血管内皮抑素联合紫杉醇作用于C57／BL6小鼠 重组人血管内皮抑素联合紫杉醇作用于C57／BL6小鼠 Lewis肺癌模型的时间窗研究 摘 要 ||IIIII IIIIIii U III UlIII I I lUI Y2809752 目的：众所周知，肺癌是目前世界上最常见的恶性肿瘤之一。近几年在医 学科研人员的不断努力下，针对肺癌的相关治疗方法不断出现，并取得了 有目共睹的疗效。重组人血管内皮抑素(恩度)联合化疗药物是临床上常 见的肺癌治疗方法，但有关其与化疗药物联用的的时间窗，目前尚不明确。 前期实验表明，重组人血管内皮抑素(恩度)联合紫杉醇作用于C57／BL6 小鼠Lewis肺癌模型，发现先恩度后紫杉醇组抑瘤效果明显优于恩度与 紫杉醇同时组，以及先紫杉醇后恩度组，然而具体使用恩度后第几天联合 化疗药抑瘤物效果最好还不清楚，而我们实验就是研究此。本实验通过测 定瘤重及计算抑瘤率、瘤体积来绘制生长曲线、用高效液相色谱法测定瘤 组织中紫杉醇浓度、通过免疫组化判定微血管成熟度及以乏氧情况、再加 上小动物活体成像技术直接观察活体小鼠的瘤组织血管情况等方法研究重 组人血管内皮抑素(恩度)联合紫杉醇作用于C57／BL6小鼠Lewis肺癌模 型的时间窗。方法：本实验包含2个部分。第一部分：取48只C57／BL6 小鼠，随机分成8组，即Groupl组(恩度1天后给予紫杉醇)、Group2 组(恩度2天给予紫杉醇)、Group3组(恩度3天后给予紫杉醇)、Group4 (恩度4天后给予紫杉醇)组、Group5组(恩度5天后给予紫杉醇)，Group6 组(恩度6天后给予紫杉醇)、Group7(恩度7天后给予紫杉醇)组和Group8 组(恩度8天后给予紫杉醇)，每组6只，通过皮下注射对数生长期的Lewis 肺癌细胞悬液建立Lewis肺癌动物模型，在动物体内通过瘤块传代3代， 万方数据 待进入实验组小鼠瘤体长到一定大小后，开始药物干预。在重组人血管内 待进入实验组小鼠瘤体长到一定大小后，开始药物干预。在重组人血管内 皮抑素(1 Omg／kg)基础上联合紫杉醇(1 Omg／kg)腹腔注射，重组人血管 内皮抑素连续给药8天，各组分别于重组人血管内皮抑素连续腹腔注射后 1、2、3、4、5、6、7、8天给药，每天观察各组小鼠的一般情况和成瘤率， 每隔一天测量小鼠肿瘤体积大小，给药结束次日颈椎脱位处死小鼠，完整 剥离肿瘤，测量肿瘤体重、抑瘤率，免疫组化判定肿瘤微血管成熟度以及 乏氧程度，通过使用高效液相色谱法(HPLC)测量各组肿瘤组织中紫杉醇 的浓度。第二部分：根据第一部分实验数据，我们统计出Group4组(先恩 度4天)的抑瘤效果最好，取9只小鼠，分为3组：A组(先恩度3天)、 B组(先恩度4天)和C组(先恩度5天)，每组3只，分别于连续腹腔 注射重组人血管内皮抑素3、4、5天后给予紫杉醇。通过活体成像技术直 接观察瘤组织内新生血管状况，进一步推到结果。结果：第一部分：与 Groupl组(先恩度1天)、Group2组(先恩度2天)、Group6组(先恩 度6天)、Group?(先恩度7天)组和Group8组(先恩度8天)相比，Group3 组(先恩度3天)、Group4(先恩度4天)组和Group5组(先恩度5天) 体积均数均较低，差异有统计学意义，P0．05。Group3组(先恩度3天)、 Group4(先恩度4天)组和Group5组(先恩度5天)之间相比差异无统计 学意义，PO．05。八组小鼠肿瘤体重均数差异无统计学意义，选择Group8 组为对照组，可以看出Group3组(先恩度3天)、Group4(先恩度4天) 组和Group5组(先恩度5天)的抑瘤率较好于其它各组，其分别为20．5％、 24．66％、23．74％