肝脏局灶性结节性增生的全外显子测序研究临床医学专业论文.docxVIP

研究生优秀毕业论文 英文缩略表英文缩写 英文缩略表 英文缩写 英文全称 中文全称 FNH Focal Nodular Hyperplasia 肝脏局灶性结节性增生 HCA Hepatocellular Adenoma 肝细胞腺瘤 FLHCC Fibrolamellar subtype of 纤维板层状肝细胞肝癌 Hepatocellular Carcinoma tFNH Telangiectatic FNH 毛细血管扩张型肝脏局灶性结节性 增s序u． NGS Next Generation Sequencing 新一代测序 IGV Integrative Genomics Viewer 整合基因组浏览器 TGF—p Transforming Growth Factor D 转化生长因子D GS Glutamine Synthetase 谷氨酰胺合成酶 HCV Hepatitis C virus 丙肝病毒 R Arginine 精氨酸 S Serine 丝氨酸 M Methionine 甲硫氨酸 T Threonine 苏氨酸 万方数据 摘要背景 摘要 背景 肝脏局灶性结节性增生(Focal nodular hyperplasia，FNH)是临床中第二高发的 良性肝脏肿瘤，仅次于肝血管瘤，女性人群的发病率明显高于男性，男／女比例在 1：8—1：12，并且女性患者的年龄主要分布于30至50岁之间。大多数FNH患者无明 显临床症状，相应病灶通常是在腹部影像学筛查时偶然发现，即使部分患者有腹痛 症状，但其与病变本身是否有直接关系目前尚无定论。经典FNH组织病理学特点 为：以纤维瘢痕为中心，由呈放射状的纤维板性隔膜分割而成的无包膜性肝细胞增 生性结节。中央纤维瘢痕区通常含有管径大小不同的异常血管以及增生胆小管。而 非典型FNH约占到总病例数的20％，共同特点为无中央纤维瘢痕性结构，其中包 含三种亚型分别为毛细血管扩张型(Telangiectatic FNH，tFNH)、增生腺瘤混合型 和非典型细胞型。FNH的病生理机制考虑是由已有的血管结构紊乱所致的增生性改 变，目前认为其本身并无潜在恶变风险。分子生物学方面的研究认为100％典型FNH 具有多克隆性，75．100％tFNH与100％肝细胞腺瘤具有单克隆性。临床上，非典型 FNH与肝细胞腺瘤、纤维板层状肝细胞肝癌较难鉴别。 二代测序技术是新一代高通量测序技术，具有高灵敏度、高测序效率、相对低 成本的优势。全外显子组测序基于二代测序技术平台，可以全面筛查具有编码蛋白 功能的全外显子组内的突变情况，对肿瘤学研究有重要的突破作用。 实验目的 通过全外显子测序技术，对FNH病变的全外显子组进行全面筛查，期望可以 发现特异的突变，对FNH的病因、病生理机制、生物学特性或者与其他肝脏病变 的鉴别中有一定提示作用。 FNH虽为第二高发的肝脏良性肿瘤，但其发病率仍相对较低。少见肿瘤中可能 会发现特异的基因突变。以少见肿瘤的特异突变为切入点，研究特异基因的功能， 进而推广到其他肿瘤中验证该基因在肿瘤发生机制中的作用，期望对肿瘤学机制研 究能有一定的提示作用。 实验材料和方法 1．病例收集 2011年至2014年由中国医学科学院肿瘤医院腹部肝胆外科手术切除肝脏局灶病变， 术后病理诊断为FNH的病例5例。收集相应肿瘤组织标本及对照全血标本。 2．全外显子组测序实验 根据全外显子组测序的规范流程，完成gDNA提取、配对验证、建立DNA文库、 外显子富集、上级测序、生物信息学分析的实验步骤。 3．数据分析 万方数据 通过复习文献，根据生物学功能、突变频率等因素进一步总结选出感兴趣的候选基因。 通过复习文献，根据生物学功能、突变频率等因素进一步总结选出感兴趣的候选基 因。 4．验证 对候选基因进行PCR／Sanger验证。 实验结果 全外显子组测序生物信息分析结果显示5例FNH标本中发现158个突变，选 出4个候选基因：ARID2、EGFR、TRPSl、D4删，其中删J在2例标本中检测 到2个不同突变。对这5个突变进行了PCR／Sanger验证，得到了其中4个突变的 阳性验证结果，包括ARID2基因14号外显子的错义突变、EGFR基因6号外显子 的移码突变、TRPSl基因3号外显子的错义突变及其5号外显子的终止密码子获得 突变。 结论 TRPSl基因在2例标本中均发现突变，突变频率较高，与FNH发病机制相关 可能性大。相关研究提示TRPSl基因的表达具有抗纤维化的作用，而典型FNH的 主要病理表现是中央纤维瘢痕，两者之间可能存在相关性，需进一步扩大样本量以 及相关功能学研究进行作证。 关键词 肝脏局灶性结节性增生、全外显子组测序、TRPSl 万方数据 AbstractBackground Abstract Ba