乙型流感病毒vero细胞冷适应株遗传重配研究病原生物学专业论文.docxVIP

1．1病毒 1．1病毒 ．．27 1．2细J咆 27 1．4抗血清 ．27 1．5主要溶液 27 1．6试验动物 27 1．7菌种 27 1．8主要实验仪器 27 1．8主要耗材及试剂 28 2．实验方法 一28 2．1在Vero细胞上的遗传重配研究 一28 2．2动物试验 30 2．3重配乙型流感病毒Vero细胞冷适应株的基因分析 。3 1 3．实验结果 一34 3．1第一代重配病毒试验结果 34 3．2重配乙型流感病毒在连续加抗血清中和后在Vero细胞上培养出病毒的鉴定 36 3．3蚀斑实验纯化病毒 37 3．4重配乙型流感病毒BVca的安全性评价 ．38 3．4．1重配乙型流感病毒BVca的小鼠毒力实验 ．．38 3．4．2鼠接种重配乙型流感病毒Vero细胞冷适应株后的肺部病理检查 40 3．5重配乙型流感病毒Vero细胞冷适应株att特征的评价 40 3．6重配流感病毒ts和ca表型研究 一4l 3．7重配病毒BX．35Vca的基因组鉴定 ．42 3．7．1重配乙型流感病毒基因的扩增与连接 ．42 3．7．2重配病毒BX．35Vca的基因组成分析 ．．43 5、 讨论 44 6．d、结 47 第三章重配乙型流感病毒BX．35Vca在Vero细胞的传代稳定性及免疫原性研究 48 引言 48 第一节重配乙型流感病毒Vero细胞冷适应株的传代稳定性评价 48 1．实验材料 。48 III 万方数据 1．1病毒 1．1病毒 ．48 1．2细胞 ．． ．．48 1．3菌种 ～48 1．4主要试剂及耗材 49 1．5试剂盒 ．49 1．7主要仪器设备和耗材 49 2．实验方法 49 2．1重配乙型流感Vero细胞冷适应株连续在Vero细胞上传代的产量分析 49 2．2重配乙型流感病毒Vero细胞冷适应株的血清学鉴定 49 2．3重配乙型流感病毒Veto细胞冷适应株BX．35Vca的基因稳定性分析 50 2．4重配乙型流感病毒ts、ca特征的判定 ．50 2．5重配乙型流感病毒Vero细胞冷适应株在Vero细胞上的增殖研究 50 2．6重配病毒的无菌检测 52 3．实验结果 53 3．1 BX．35Vca在Vero细胞上的连续传代 ．53 3．2 BX．35Vca的血凝抑制实验鉴定 53 3．3 BX．35Vca的ts、ca特征检测 。54 3．4 BX-35Vca的单向免疫扩散实验(Single Radial Immunodiffusion，SRID) 54 3．5 BX．35Vca在Vero细胞上的蚀斑 ．55 3．6免疫荧光检测不同时间点BX．35Vca在Vero细胞上的分布 56 3．7 Western．blot检测证明BX．35Vca的NP蛋白表达比BX．35强早 57 3．8 Real-time PCR检测证明BX．35Vca复制能力比BX．35强 57 3．9重配病毒BX．35Vc的基因稳定性分析 一58 3．10无菌检测结果 58 4．讨{仑 58 5．，J、结 60 第二节BX．35Vca在BALB／C小鼠的免疫原性及保护效力评价 ．．60 1．实验材料 一60 1．2病毒 60 1．3细胞 一60 IV 万方数据 万方数据 万方数据 1．4主要抗体及试剂盒 1．4主要抗体及试剂盒 6l 1．5耗材 61 1．6仪器和设备 61 2．实验方法 ．．6l 2．1病毒感染性滴度测定 6l 2．2动物实验 ．61 2．3统计 ．63 3．实验结果 63 3．1 BX．35Vca的免疫原性评价 63 3．2 BX．35Vca免疫小鼠后脾CD4+、CD8+细胞的变化及肺sIgA的检测 ．．64 3．3攻毒保护实验 65 3．3．1致死性攻毒保护实验 ．65 3．3．2致死性攻毒后小鼠上下呼吸道病毒载量的分析 ．67 4．讨论 68 5。d、结 70 结论 ．．71 参考文献： 72 非论文综述 ．80 附录I ．．90 附录II基本实验操作 ．95 附录ⅡI溶液配置 ．104 V 万方数据 万方数据 中文摘要流行性感冒病毒，简称流感病毒，属正粘病毒科(Orthomyxoviridae)，其为有 中文摘要 流行性感冒病毒，简称流感病毒，属正粘病毒科(Orthomyxoviridae)，其为有 包膜的单负链RNA病毒，其基因组分为8个节段。根据流感病毒核蛋白(NP)和 基质蛋白(M)抗原性的差异可划分为甲(A)、乙(B)和丙(C)三型。乙型流 行性感冒病毒虽然没有像甲型流感病毒一样引起过人群内的大流行，但是能通过抗 原漂移，产生新的病毒，每年能引起世界范围内的季节性流行，严重威胁人类的健 康和生命安全。因此，季节性流感疫苗由A(H1N1)、A(H3N2)和乙型病毒共同 组成生产毒株。 目前己上市的季