生育三烯酚通过wnt信号途径诱导结肠癌细胞死亡的机制分析公共卫生与预防医学;卫生毒理学专业论文.docxVIP

天津医科人学硕十学位论文中文摘要 天津医科人学硕十学位论文 中文摘要 目的 本研究旨在通过体外培养人结肠癌SW620细胞，利用分子生物学实验技术， 以Wnt信号途径为中心，探讨生育三烯酚诱导结肠癌细胞发生死亡的分子机制。 方法 1．生育三烯酚对SW620细胞增殖的影响 体外培养SW620细胞，分别加入不同浓度生育三烯酚(6．生育三烯酚终浓 度分别为0、1、2．5、5、lO、1 5、20、25、30和40岬ol／L；丫．生育三烯酚终浓 度分别为0、5、10、15、20、25、30、40、50、60、70、80、90和1009mol／L) 和乙醇(溶剂对照)作用24 h后，以MTT实验分别观察Y．、6．生育三烯酚对 SW620细胞存活率的影响。 分别以浓度为5、10、15、209mol／L的6．生育三烯酚及15、30、45、601．tmol／L 的Y．生育三烯酚和乙醇(溶剂对照)作用于细胞，利用荧光染色(AO／EB染色， DAPI染色)、电镜超微结构观察、流式细胞术、Caspase．3活性测定等方法检测 细胞的死亡情况，并比较加入z．VAD．fmk与否时细胞的存活率。 2．生育三烯酚抑制SW620细胞增殖的机制研究 体外培养SW620细胞，分别以浓度为5、lO、15、209mol／L的6一生育三烯 酚及15、30、45、601,tmol／L的Y一生育三烯酚和乙醇(溶剂对照)作用于细胞。 24h后，提取细胞内总RNA进行Real—time RT-PCR检测wnt一1、13-catenin、cyclin D1、c-jun、MMP．7的mRNA表达。同时，提取总蛋白进行Western blot检测上 述蛋白的表达情况。 结果 1．丫一、6一生育三烯酚分别作用24 h后，与乙醇对照组相比，各剂量组丫．、6一生 育三烯酚均可以使SW620细胞存活率降低(氏O．05)，且细胞存活率分别随 着丫．、6．生育三烯酚剂量的增加呈现降低的趋势。丫．、6一生育三烯酚对SW620 细胞的IC50值分别为31．351amol／L，15．18I，tmol／L。 2．通过细胞形态学观察发现，Y一、6一生育三烯酚分别作用SW620细胞6和24 h 后，细胞内未见细胞核不规整，膜泡化，核染色体DNA浓缩、着边呈新月 天津医科大学硕士学位论文状，凋亡小体形成等典型的凋亡现象，取而代之的是细胞内出现大量空泡。 天津医科大学硕士学位论文 状，凋亡小体形成等典型的凋亡现象，取而代之的是细胞内出现大量空泡。 电镜结果显示线粒体发生了肿胀及空泡变。 3．CaLspase抑制剂z．VAD．fmk加入后，SW620细胞生存率仍随着6．生育三烯酚 的剂量增加而呈现下降的趋势(尸O．05)，相同剂量组问细胞生存率的差异不 ．具有统计学意义(尸O．05)；6．生育三烯酚分别作用SW620细胞6和24 h后， 处理组细胞凋亡率与对照组比较，差异没有统计学意义(胗O．05)；6．生育三 烯酚作用SW620细胞24 h后，随作用剂量的增加，Caspase一3活性并未增强 (胗0．05)。Y．生育三烯酚的结果与6．生育三烯酚的结果相类似。 4．在不同剂量的6．生育三烯酚作用24h后，SW620细胞内wnt．1、13-catenin的 mRNA和蛋白的表达量下降；对Wnt信号途径下游癌基因cyclin D1、MMP．7 的mRNA表达无影响，但是能够降低cyclinDl、MMP．7蛋白量的水平。 5．在不同剂量的Y．生育三烯酚作用24h后，SW620细胞内13-catenin、c-jun、cyclin D1的mRNA和蛋白表达量有不同程度的下降；对wnt一1、MMP一7的mRNA 表达无影响，但可使其蛋白表达量有不同程度的下降。 结论 1．证实生育三烯酚抑制SW620细胞增殖。同时，发现6．生育三烯酚对SW620 细胞的抑制作用强于Y一生育三烯酚。 2．生育三烯酚可以诱导SW620细胞产生paraptosis样死亡。 3．生育三烯酚对Wnt信号途径的影响可能是其诱导SW620细胞paraptosis样死 亡的机制之一。 关键词： 生育三烯酚人结肠癌SW620细胞程序性死亡paraptosis Wnt 譬’177 信号途径 辩 天津医科人学硕十学位论文Abstract 天津医科人学硕十学位论文 Abstract ObjectiVO The purpose of this study was to determine the mechanism of tocotrienols induced cell death on the Wnt signaling pathway in colon cardnoma cells(SW620)by the method of cell cult