生物节律紊乱动脉粥样硬化小鼠中钟基因脂质代谢相关基因改变的研究病理学与病理生理学专业论文.docxVIP

2 2 01 1 年复 旦 大 学 硕 士 研究 生 毕业 论文 与昼 夜 节 律 生 物 钟 之 问建 立 了功 能 水 平 和 分 子 水 平 上 的 联 系 。所 以我 们 同 时 还 检 测 了 不 同 组 小 鼠 四 种 组 织 中 sirtl 基 因 的 表 达 ，通 过 观 察 动 脉 粥 样 硬 化 小 鼠 24 小 时 内 sirtl 基 因表 达 的 动 态 变 化 ，来 研 究 sirtl 基 因 表 达 节律 改 变 在 脂 质 代 谢 异 常 及 动 脉 粥样 硬 化 发 生 发 展 中 的作 用 。最 后 我 们 进 一 步研 究 了 H 2S 对 小 鼠肝 脏 细 胞 昼 夜 节 律 的 影 响 ，从 而 探 讨 能 量 代 谢 改 变 与 小 鼠生物 钟 紊 乱 之 间 的 联 系 。 第 一 部 分 ：生 物 节 律 紊 乱 动 脉 粥样 硬 化 小 鼠中钟 基 因 、脂 质 代 谢 相 关 基 因 的 改 变 目的 ：观 察 昼 夜 节 律 紊 乱 的 小 鼠动 脉 粥样 硬 化 模 型 中生 物 钟 基 因 以及 脂 质 代 谢 相 关 基 因 表 达 的 改 变 ,并 探 讨 其 机 制 。 方法 ：采用 apoE -/-小 鼠 （C 57B L/6J 来源 ）和 C 57B L /6J 小 鼠通过光 照变化 建立生物节律紊乱的动脉粥样硬化小 鼠模型 。用 6 周龄的 apoE -/-雄性小 鼠 24 只 , 分为两组 ，一组给予普通膳食 ，另一组西方类型膳 （含有 0.15% 胆 固醇和 2 1% 脂 肪)；以 24 只 C 57B L /6J 雄性 同龄小 鼠作对照 ，同样 分为两组饲养 。所有小 鼠均 给 予 12 小 时 光 照 12 小 时 黑 暗 两 周 、12 小 时 黑 暗 12 小 时光 照 两 周 、12 小 时 光 照 12 小 时 黑暗 两 周 （12L /12D 2w , 12D /12L 2w ,12L /12D 2w ), 共 6 周 的不 规 律 光 照 ，导致小 鼠昼夜节律紊乱 。记录各组小 鼠实验前后体重变化 ；根据 Z eitgeber T im e(给予光照时刻 记为 Z T 0)，分别在 Z T O (8am )、Z T 4 (12am )、Z T 8 (4pm )、 Z T 12 (8pm )、Z T 16 (0am )、Z T 20 (4am ) 6 个 时 间 点处死 小 鼠 ，摘 眼 球 取 血 制 备 血 清 ，检测 血清 葡 萄 糖 、总胆 固醇 、甘 油 三 酯 、高 密度 脂 蛋 白和 低 密度 脂 蛋 白 含 量 ；取 小 鼠主动 脉 弓做 冰 冻 切 片 ，油 红 0 染 色 检 测 动 脉 粥样 斑 块 ；取 小 鼠的 心 脏 、肝 脏 、下 丘脑 和 附睾脂 肪 垫液 氮速 冻 保存 于-70 °C 。利 用 R eal-tim e P C R 检 测不 同组小 鼠四种组织中生物钟基因 m C lock 、m B m all、m Per2 、m C ryl、m R ev-erb a 和脂质代谢相关基 因 ppar a 、ppar y 、ror a 、rxr y 、 以及 sirtl 基 因表达 的动 态 变 化 。 结果 ：经过六周 的光照刺激 （12L /12D 2w ，12D /12L 2w ，12L /12D 2w )，给予西 方 类 型膳 的 apoE -/-小 鼠主动 脉 弓处 可见 明显 的粥样 易损 斑 块 （脂 质 池 大 、纤 维 帽 薄 、 内皮 部 分 剥 脱 表 面 有 血 小 板 聚 集 ），且 血 清 葡 萄 糖 、总 胆 固醇 以及 低 密度 脂蛋 白均 高于普食饲养组 。普食饲养 的 apoE -/-小 鼠也可见粥样斑块形成但斑块 脂 质 核 小 ，纤 维 帽厚 ，斑 块表 面 内皮 完整 ，纤 维帽肩 部平 滑 。西 方类 型 膳 饲 养 的 C 57B L /6J 小 鼠仅 可 见 内膜 下 少 量 脂 质 沉 积 和 泡沫 细 胞 形 成 ，血 清 葡 萄 糖 、总 月y 固醇 以及低 密度 脂 蛋 白均 高 于 普 食饲 养组 。普 食饲 养 的 C 57B L /6J 小 鼠血 管 内未 见 到 明显 病 理 变 化 。R eal-tim e P C R 结果 显 示 在 正 常 小 鼠中恒 定 表 达 的 m C lock 基 因在 apoE -/-敲除小 鼠肝脏 、下丘脑 中的表达 量 明显 高于 C 57B L /6J 组 小 鼠，在 2 2 2 0 11 年复 旦大 学 硕 士 研究 生 毕业 论文 心 脏 和 脂