中国甜柿‘鄂柿1号’自然和40℃温水脱涩前后差异蛋白是质组学分析-果树学专业毕业论文.docxVIP

华中农业大学2016届硕士研究生学位论文3．1．2 华中农业大学2016届硕士研究生学位论文 3．1．2 中国甜柿‘鄂柿1号’自然脱涩与人工脱涩过程中单宁含量变化 ．19 3．2 蛋白质组学结果初步分析 ．．21 3．2．1 ‘鄂柿1号’不同处理蛋白样品质量检测结果 ．．21 3．2．2iTRAQ标记结果及初步分析 ．．22 3．3 蛋白质组数据的生物信息学分析 ．24 3．3．1 层次聚类分析 ．．24 3．3．2 柿果实蛋白组GO功能注释 ．25 3．3．3GO富集分析 ．．25 3．3．4KEGfi功能注释及富集分析 28 4 讨论 ．30 4．1中国甜柿‘鄂柿1号’自然与温水脱涩特点 ．．30 4．2中国甜柿‘鄂柿l号’自然脱涩的可能机理分析 ．．31 5 进一步研究计划 35 参考文献 36 附勇之 ．．45 作者简历及在学期间的科研活动 53 致谢 ．．54 Ⅱ 万方数据 中国甜柿‘鄂柿1号’自然和40℃温水脱涩前后差异蛋白质组学分析摘要 中国甜柿‘鄂柿1号’自然和40℃温水脱涩前后差异蛋白质组学分析 摘要 ‘鄂柿1号’是在湖北省大别山区发现的一个中国原产完全甜柿(“中国甜柿 或C．PCNA)新种质。该品种果实大，种子少，栽培价值高于‘罗田甜柿’，但其 自然脱涩特点和机理研究鲜有报道。本研究以中国甜柿‘鄂柿1号’为主要试材， 以中国甜柿‘罗田甜柿’、日本甜柿(“日本原产完全甜柿”或J．PCNA)‘阳丰’ 和非完全甜柿‘磨盘柿’为对照，通过检测自然及40℃温水脱涩处理前后果实可 溶性单宁含量变化，同时利用iTRAQ技术分析其蛋白组学差异，以期探讨中国甜柿 ‘鄂柿1号’自然脱涩特点及其可能的分子机理。主要研究结果如下： 1．四个柿品种不同时期单宁变化各不相同， ‘罗田甜柿’、‘鄂柿1号’自然 脱涩主要集中在20 WAF至25 WAF，远远晚于‘阳丰’(10 W虹)。‘罗田甜柿’、 ‘鄂柿1号’在10 WAF至15 WAF期间不溶性单宁含量相对前期迅速上升，且此 时可溶性单宁含量下降，进一步验证‘鄂柿1号’自然脱涩既有“稀释效应”又存 在“凝固效应。 2． ‘鄂柿1号’果实不同处理条件下可溶性单宁含量变化不同，40℃温水处 理使柿果在处理12 h后基本完成脱涩。且不可溶性单宁含量升高与可溶性单宁含量 直线下降时期相对应。因此，初步推测‘鄂柿1号’40℃温水处理过程中亦存在“凝 固效应”。 3．通过iTRAQ技术共鉴定到4954个蛋白质类别数(protein group)，2段以 上不同肽段(unique peptide)覆盖的蛋白3041个，占全部蛋白的61．37％。其蛋白 质分子量10．70 kDa；等电点4．7．7．4和7．9．9．5。以(F10)为内参，差异倍数为 1．2为标准对所鉴定4954个蛋白质进行筛选，获得约500个差异蛋白。 4．生物信息学分析结果表明在‘鄂柿1号’自然脱涩与人工脱涩过程中均涉及 一些与能量代谢相关、信号转导相关、内质网上蛋白质加工的代谢途径、与果实成 熟、响应刺激相关等代谢途径。自然脱涩情况下主要涉及类黄酮合成，苯丙烷合成 途径的下调表达，ABC转运模型，木质素代谢途径上调表达；而人工脱涩情况下主 要是各种应激反应、氧化还原反应的上调表达。 综上所诉，‘鄂柿1号’自然脱涩和40℃温水脱涩均存在“凝固效应”；iTRAQ 技术获得的4954个蛋白，差异蛋白所占比例为10％，数据结果较为理想；‘鄂柿1 号’主要通过苯丙烷合成途径的下调表达及木质素代谢途径上调表达来完成自然脱 涩。 关键词：柿；脱涩；iTRAQ；蛋白质组 万方数据 华中农业大学2016届硕士研究生学位论文Abstract 华中农业大学2016届硕士研究生学位论文 Abstract ‘Eshi 1’persimmon is a native Chinese Pollination Constant and Non-Astringent type(C—PCNA)property which was newly found in Dabieshan region．It has bigger fruit and fewer seeds than‘Luotian-tianshi’，and more valuble to breeding and planting．But its nature of astringency loss has few reports．In this study,C-PCNA type‘Eshi 1’were used as metefials，C-PCNA type‘Luotian-tianshi’，J-PCNA(Japanese Pollination Constant and Non-Astringen