体内药物分析对分分析方法的特殊要求.ppt

体内药物分析对分析方法的要求 体内药物分析的特点 体内药物分析的特殊性 体内药物分析与普通药物分析的异同 ①分析目的：同：二者均以药物应用的安全性和有效性为目的 异：普通：以控制药品质量为目的 体内：以考察体内药物浓度、状态和过程为目的 ②分析方法： a、灵敏度：普通：一般可通过增加样品量来提高灵敏度，化学分析法、仪器分析法均可 体内：一般不能通过增加样品量来提高灵敏度，且样品中血浓极低，对方法灵敏度要求较高，定量测定只能用仪器分析法 b、选择性：普通：仅考虑原料及制剂中有关物质、制剂中的辅料、复方及中药材中共有组分干扰 体内：除考虑干扰成分外，还有内源性成分、代谢物的干扰，选择性要求很高 ③样品的性质：普通：正常情况下，样品中药物的化学结构、存在状态、含量等一般均保持恒定 生物样品：化学结构发生变化 受代谢酶的作用，会生成代谢物 存在状态发生变化 可与生物大分子不同程度结合 药物浓度发生变化 药浓动态变化，波动范围3个数量级以上 一、待测药物的理化性质及体内存在状况 待测药物的理化性质 药物在生物体内的存在状况 药物在生物体内的生物转化(代谢)途径 预处理（物理性质） 预处理（体内状态） 2.生物样品的稳定性 短期稳定性： 主要考察模拟生物样品在室温、4℃或－20℃以及冻－融循环条件下的稳定性 长期稳定性：主要考察生物样品长期冰冻（－20 ℃或－80℃）后的稳定性，考察期限从生物样品的采集到分析完毕的整个时间区间。 要求：室温下存放一般仅考察1个工作日（如1、2、4、8、24h） 冰箱中存放需考察数个工作日（或数星期、数月） 三.实际生物样品的测试 目的：考察代谢产物对药物、内标物质的干扰情 况，进一步验证方法的可行性 用于实际生物样品分析之前： 需要验证 (validation) 分析方法的可行性与可靠性 方法验证时应考虑影响分析方法的所有可变因素： 取样、样品制备、色谱分离、检测与数据评价 使用的样品 —通常采用模拟生物样品和用药后的实际生物样 验证的技术指标 —效能指标 首先为分析方法的验证 —特异性、精密度与准确度、回收率、定量限与检测限、稳定性等 其次为生物基质中待测药物稳定性的验证 —室温放置、冷冻（或冷藏）、冻-融循环 Freeze-and-thaw cycle 验证的效能指标与基本要求 1．特异性（专属性）—避免干扰 2．标准曲线与线性范围—覆盖所有浓度范围 3．准确度—与实际状况相符 4．精密度—结果可重现 5．定量限—达到峰浓度的1/10～1/20 6．稳定性—确保所有样品准确测定 7．提取回收率—确保检测的灵敏度 1.方法准确度(accuracy) 系指用该方法测得的生物样品中待测药物的浓度与其真实浓度的接近程度 理论上应使用实际生物样品测定，但实际生物样品的浓度是未知的。所以，通常使用模拟生物样品测定，以测得的浓度与添加的理论浓度比较计算求得。 一般用相对回收率(relative recovery，RR) 或 相对误差(relative error，RE)表示 计算 测定值M(measured)的平均值与理论浓度(加入值)A(added)比值 相对回收率 相对误差 限度要求 —相对回收率应在85%～115% (LOQ附近80%～120%) —RE在±15% (LOQ附近为±20%) 2. 方法精密度(precision ) 系指每次测定结果与多次测定的平均值的偏离程度 表示该分析方法的可重复性(reproducibility) 反映分析方法的可操作性，是方法验证的基本要点之一 理论上，精密度应使用实际生物样品测定。但实际上生物样品的量有限(如血浆，一般为0.5～2ml) 使用模拟生物样品测定，且通常与方法准确度评价同时进行，如日内精密度即可使用方法准确度的测定数据计算。 3. 萃取回收的限度要求 在药代动力学和生物利用度研究中 对?g/ml级水平的RSD一般应≤10% ng/ml级水平的RSD一般应≤15% 在LOQ附近RSD应≤20%。 （1）方法准确度(或相对回收率，relative recovery) （2）萃取回收率(绝对回收率，absol