大鼠视网膜血管的电紧张传导的研究眼科学专业论文.docxVIP

一———J监 一———J监 大鼠视网膜血管电紧张传导 及血管紧张素II对其影响的研究 中文摘要 第一部分：大鼠视网膜血管的电紧张传导 研究目的在于探讨视网膜血管各级血管之间相互的电紧张联系，进一步了 解视网膜血管收缩舒张的自主调节机制。选用成年Long—Evans大鼠，新鲜分离 视网膜血管，台盼蓝染色观察其细胞活性，玻璃电极封接血管壁层细胞，穿孔 膜片钳单记录观察各级血管电流．电压(I．V)关系，并利用穿孔膜片钳双记录观 察各级血管电紧张传导，探讨其电紧张传导模式。 结果显示：新鲜分离的视网膜血管可稳定获得，按血管管腔大小、壁层细 胞密度和形态，可将获得的视网膜血管分为第二级小动脉、第三级小动脉及毛 细血管三级。各级血管的细胞的成活率为90％以上，显微镜下清晰可辨各级血 管壁层细胞，适于膜片钳记录其离子变化；视网膜各级血管壁层细胞单一电生 理记录显示，各级血管的静息电位为．38 4-1 mV(n=27)，一42 4-1 mV(n=29) 和一45-4-1 mV(n=10)，经单因素方差分析无明显统计学差异(P=0．27)。当细 胞膜电压为．50mV时，各级血管的输入电阻分别为：175 4-19 MQ(n=27)，151 4-9 MQ(n=29)和127 4-15 MQ(n=10)，单因素方差分析无明显统计学差异(尸 =0．58)。于壁层细胞行膜片钳双记录，结果发现，电紧张传导沿毛细血管水平 轴向最为高效，其电紧张传导比为0．56 4-O．15(n=27)，每100 lam的衰减仅为 2 4-2％伍=27)；在第三级小动脉，其电紧张传导比为0．27 4-0．09(n=22)，每 4- 100 p,m的衰减仅为6-t-8％(n=22)；在第二级小动脉，电紧张传导比为0．25 0．19 fn=10)，每100 gm的衰减为6士8％(n=10)。三组间的衰减率没有统计学 差异。 研究发现，视网膜血管的电紧张传导主要通路为壁层细胞一内皮细胞一壁 层细胞，各级血管内部的水平轴向传导高效，尤以毛细血管传导效率最高，传 导的衰减主要发生于壁层细胞和内皮细胞之间，以及跨各级血管的水平轴向传 导之间。 盟态堂盟±诠塞一 盟态堂盟±诠塞 一 第二部分：血管紧张素II对大鼠视网膜血管电紧张传导的影响 目的在于研究血管活性因子——血管紧张素II对视网膜血管自主调控的影 响。选用成年Long．Evans大鼠，新鲜分离视网膜血管，免疫组织化学显示血管 紧张素II 1型受体在血管上的表达，利用穿孔膜片钳单记录观察500nM血管紧 张素II对视网膜各级血管电生理的影响，利用钙离子显像观察500nM血管紧张 素II在视网膜各级血管壁层细胞引起的细胞内钙离子的变化，并利用穿孔膜片 钳双记录观察其对视网膜血管电紧张传导的影响。 结果显示：视网膜各级血管均表达血管紧张素II 1型受体，形态学分布未 见明显差异。500nM血管紧张素II引起壁层细胞非选择性阳离子通道开放，电 流产生主要部位为毛细血管，从．108mV至．38mV，产生的内向电流明显大于生 理对照：从+12mV至+22mV，外向电流亦明显大于对照(n=8，PO．0001)。然 而，在第三级小动脉和第二级小动脉，500nM血管紧张素II引起的电流变化明 显小于毛细血管的电流变化，与生理对照相比亦无统计学差异。500nM血管紧 张素II引起壁层细胞内钙离子升高的主要部位亦是毛细血管，其周细胞钙离子 浓度改变最大值达325±20 nM(n=81)，明显高于第三级小动脉肌细胞钙离子 浓度变化(55±3 nM，n=149，P0．0001)和第二级小动脉平滑肌细胞钙离子浓 度变化(10±2 nM，n=130，尸O．0001)。500nM血管紧张素II明显抑制视网膜 各级血管水平轴向电紧张传导(每100Irtm衰减率～50％)，但是对壁层细胞．内皮 细胞之间的传导无明显作用。 研究发现：在视网膜血管，虽然血管紧张素II 1型受体分布于视网膜各级 血管，其介导的非选择性阳离子通道的开放和钙离子增加主要部位却是毛细血 管。然而，血管紧张素II可使各级血管水平轴向电紧张传导的效率明显降低， 且这种作用并不依赖于细胞内钙离子明显变化。视网膜血管的电紧张传导是动 态接受局部血管活性因子调节的。 关键词：视网膜血管；穿孔膜片钳；电紧张传导；血管紧张素II 中图分类号：R774 2 墓塞揸噩一 Study on Electronic Transduction of the Rat Retinal 场sculature and the Role of Angiotensin II Abstract Part One：The electrotonic transduction along the rat retinal vasculat