蛋白质的共价结.pptVIP

8. 确定二硫键的位置 对角线电泳 蛋白质的氨基酸顺序测定策略 8步骤 （片断重叠法） 1. 多于1条多肽链时，分开多肽链 2. 断裂二硫键 3. 测定每条链的氨基酸组成 4. 确定N末端和C末端的残基 5. 将肽链裂解成小片断，对每个片断进行测序 6. 利用不同的切开方法，重复5，获得一套不同的片断 7. 通过片断重叠，获得蛋白质的氨基酸顺序 8. 确定二硫键的位置 例题 由下列信息求八肽的序列。（a）酸水解得 Ala，Arg，Leu，Met，Phe，Thr，2Val（b）Sanger试剂处理得DNP-Ala。（c）胰蛋白酶处理得两个肽段，分别是Ala，Arg，Thr 和 Leu，Met，Phe，2Val。当以Sanger试剂处理时分别得到DNP-Ala和DNP-Val。（d）溴化氰处理得 Ala，Arg，高丝氨酸内酯，Thr，2Val，和 Leu，Phe，当用Sanger试剂处理时，分别得DNP-Ala和DNP-Leu。 Ala-Thr-Arg-Val-Val-Met-Leu-Phe 蛋白质的一级结构 蛋白质的氨基酸顺序和组成是蛋白质实现其生物学功能的基础 研究同源蛋白质中氨基酸顺序，发现不同物种的同源蛋白质的氨基酸顺序有序列同源性 同源蛋白质：存在于不同的生物体内，但具有相同或相似的生物学功能 同源蛋白质中氨基酸顺序的种属差异与生物进化 比较同源蛋白质的序列，发现有许多位置的氨基酸残基是相同的，称为不变残基，有的位置的氨基酸残基对不同种属来说差异较大，称为可变残基 不变残基对蛋白质的生物学功能至关重要，其中有的可能参加维持分子构象；有的可能参与功能；可变残基的变换不影响蛋白质的功能 例子：细胞色素C是一个高度保守的蛋白质，是电子传递蛋白 不同生物来源的细胞色素c中不变的AA残基 细胞色素c分子的空间结构 不变的AA残基 35个不变的AA残基，是Cyt C 的生物功能所不可缺少的。其中有的可能参加维持分子构象；有的可能参与电子传递；有的可能参与“识别”并结合细胞色素还原酶和氧化酶。 100 14 10 6 1 34 32 30 29 27 18 17 67 59 52 51 48 45 41 38 87 84 82 80 70 68 91 Gly Gly Phe Cys Gly Gly Gly Arg Lys Gly Cys Lys Phe His Pro Leu Gly Arg Tyr Ala Asn Trp Tyr 70 75 80 Lys Lys Lys Pro Pro Tyr Ile Gly Thr Met Asn Leu 血红素 Cyt C的进化 通过对不同物种的CytC序列比较，发现其氨基酸差异数目与这些物种间的系统发生差异是成比例的，即亲缘关系越近，其氨基酸组成和序列的差异越小 这个发现可用于建立蛋白质的进化树，是分子进化研究的基础 不同生物的Cytc的AA差异数目 根据细胞色素 C的顺序种属差异建立起来的进化树 同源蛋白质具有共同的进化起源 以氧合血红素蛋白质为例 肌红蛋白，一条多肽链 血红蛋白，4个亚基，2条a链，2条b链 肌红蛋白， a链，b链都是珠蛋白，有很高的序列同源 肌红蛋白和 a链有38个氨基酸残基相同， a链和b链有64个残基相同 蛋白质的共价结构Covalent Structure of Proteins 肽 peptide 一个氨基酸的氨基与另一个氨基酸的羧基之间失水形成的酰胺键称为肽键 氨基酸通过肽键连接起来的线性聚合物称为肽 在多肽链中，氨基酸残基按一定的顺序排列，这种排列顺序称为蛋白质序列（Sequence），也称为蛋白质的一级结构（共价结构） 多肽链的一端称为氨基端或N端；另一端称为羧基端或C-端 书写时，N末端在左，C末端在右 肽的酸碱化学 短肽的酸碱性质决定于肽链末端的游离a-羧基和a-氨基以及侧链上的可解离基团 P195 第5题 求三肽Lys-Lys-Lys的pI （1）找出可解离基团：N末端氨基，C末端羧基，3个侧链氨基，共5个 （2）写出解离过程:根据解离常数判断基团的解离顺序 P4+ → P3+ → P2+ → P- K1 K2 KR （3）判断pI时的解离情况： 等电点时，净电荷为零，此时每个侧链氨基都带1/3正电荷,即侧链三个氨基各解离2/3，还剩1/3未解离 （4）根据H-H公式计算pH pH＝pKR＋lg[质子受体]/[质子供体] pI＝10.53＋lg(2/3)/(1/3)=10.53+lg210.53 天然存在的活性肽 许多分子量比较小的多肽以游离状态存在。这类多肽通常都具有特殊的生理功能，常称为活性肽 类别：激素、抗生素、辅助因子 如：催产素