植物脱毒技术.ppt

植物脱毒 一、脱毒苗培育的意义 二、脱毒的方法 三、脱毒苗生根培养与驯化移栽 四、脱毒苗鉴定 五、脱毒苗保存与繁殖 一、脱毒苗培育的意义 （一）植物病毒的危害 （二）病毒传播的方式 （三）脱毒苗培育的意义 二、脱毒的方法 （一）茎尖培养脱毒 （二）热处理脱毒 （三）茎尖脱毒与热处理相接合 （四）微体嫁接脱毒法 （五）愈伤组织培养脱毒 （六）珠心胚培养脱毒法 （七）花药培养脱毒 （八）抗病毒药剂法 （一）茎尖培养脱毒 1．微茎尖培养脱毒机理 2．微茎尖培养脱毒的过程 感染病毒植株 顶芽或腋芽 剥离茎尖 茎尖培养 植株再生 病毒检测 离体快繁 防虫网室内繁殖脱毒苗 图11-1 微茎尖培养生产脱毒苗的流程图（陈世昌，2011） 马铃薯脱毒 马铃薯脱毒技术 任务1 选取外植体并灭菌 任务3 解剖镜下茎尖剥离与接种 任务2 准备培养基 任务4 继代培养 任务5 诱导生根 任务6 试管苗驯化移植 * 任务一 外植体选取及消毒 选择：选取生长旺盛、健壮、无病或患病相对较轻的的植株。切取4-6cm的顶芽或侧芽，除去外部可见的小叶。 消毒：先用自来水冲洗30mink，再用75%的酒精漂洗几秒到十几秒，然后用0.1%的氯化汞或20倍的次氯酸钠液消毒10-15min。消毒后的材料用无菌水冲洗3次。 任务二 准备培养基 初代培养：MS+0.5mg/L6-BA+0.1mg/LGA3 +0.1mg/LNAA+3%蔗糖+5g/L琼脂，PH5.8 继代增殖： MS+0.1mg/LNAA+3%蔗糖+5g/L琼脂，PH5.8 * 将消毒后的材料在解剖镜下进行剥离，如果是用于快速繁殖的茎尖材料可带2-4个叶原基或更多，如果是用于脱毒的切取0.1-0.5mm,带1-2个叶原基，并迅速接到培养基上。 解剖镜下剥取茎尖 任务三 茎尖剥离和接种 任务四 继代培养 （二）热处理脱毒 1．热处理脱毒的原理 2．热处理脱毒的方法 ①温烫处理脱毒法 ②热空气处理脱毒法 3．影响热处理脱毒的因素 4．热处理的优缺点 （三）茎尖脱毒与热处理相接合 （四）微体嫁接脱毒法 （五）愈伤组织培养脱毒 （六）珠心胚培养脱毒法 （七）花药培养脱毒 （八）抗病毒药剂法 三氮唑核苷、5-二氢尿嘧啶、双乙酰-二氢-5-氮尿嘧啶、 三、脱毒苗生根培养与驯化移栽 四、脱毒苗鉴定 （一）直接观察法 （二）指示植物鉴定法 1．汁液涂抹鉴定 2．小叶嫁接法 待检草莓叶，叶柄削成楔形 指示植物 削去中间小叶，从切口纵切1.5cm左右 将削好的待检小叶插入切口 封口膜包扎 喷少量水，用小孔塑料袋罩上，放入防虫网室，10d后去袋 图11-2 草莓指示植物小叶嫁接检测法 指示植物 待检植物 砧木 砧木 指示植物 待检植物 图11-3双重芽接法（王国平，2002） 图11-4双重切接法（王国平，2002） 3．双重芽接法 4．双重切接法 （三）抗血清鉴定法 （四）分子生物学鉴定法 1．双链RNA法（dsRNA） 2．核酸杂交技术 人工合成能与病毒碱基互补的 (cDNA） 3．聚酶链反应技术（PCR) （五）电镜检测法 五、脱毒苗的保存与繁殖 （一）脱毒苗的保存 1．隔离保存 2．离体保存 （1）低温保存 （2）超低温保存 ①快速冷冻法 ②慢速冷冻法 ③分步冷冻法 ④干燥冷冻法 （二）脱毒苗繁殖